碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)
产品简介:
碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需zui适pH9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮,还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜。
碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)不是采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性,而是采用偶氮偶联法(又称同时偶联法),其原理是在pH9.2~9.8的碱性条件下,细胞内碱性磷酸酶可使AB-BI磷酸盐水解,释放出磷酸不萘酚,后者与偶联重氮盐生成有产物,定位于细胞质中。该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、梯度入水后的石蜡切片等的碱性磷酸酶染色,碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨,结果较金属盐沉淀法可靠。
产品组成:
编号 名称 | D2804 4×2ml | D2804 4×10ml | D2804 4×20ml | Storage |
试剂(A):ALP固定液 | 2ml | 10ml | 20ml | RT避光 |
试剂(B): ALP孵育液 | B1:AS-BI染色液 | 1ml | 5ml | 10ml | -20℃避光 |
B2:FBB染色液 | 1ml | 5ml | 10ml | -20℃避光 |
临用前,按 B1:B2=1:1 比例混合,即为 ALP 孵育液,即配即用。 |
试剂(C):核固红染色液 | 2ml | 10ml | 20ml | 4℃避光 |
试剂(D):甲基绿染色液 | 2ml | 10ml | 20ml | RT避光 |
使用说明书 | 1份 |
自备材料:
1、载玻片、湿盒
2、显微镜
操作步骤(仅供参考):
(一)、涂片或切片
1、血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蜡切片无需固定),水洗。
2、滴加配制好的ALP孵育液,放入湿盒中,避光孵育15~20min,水洗。
3、入核固红染色液或甲基绿染色液复染3~5min。
4、水洗、镜检或甘油明胶封固后镜检。
(二)贴壁培养细胞
1、取6孔板或其他容器培养的细胞,弃液,PBS清洗干净。
2、加入ALP固定液固定3min或4%多聚甲醛固定10~15min,PBS清洗。
3、滴加配制好的ALP孵育液,放入湿盒中,避光孵育15~20min,PBS清洗。
4、入核固红染色液或甲基绿染色液复染3~5min。
5、PBS 清洗、镜检。
染色结果:
ALP活性部位 | 蓝色 |
细胞核 | 红色(核固红)或绿色(甲基绿) |
血液、骨髓涂片结果判断:
一般以积分报告结果,根据 100 个中性粒细胞阳性颗粒进行 0~4+计分。
细胞分值 | 染色特点 |
0 | 无颗粒 |
1 | 稍有颗粒 |
2 | 中等程度颗粒 |
3 | 多数颗粒 |
4 | 充满颗粒 |
临床意义:
1、类白血病反应积分明显增高,未经治疗的慢性粒细胞白血病积分明显减低。
2、急性细菌感染积分明显增高,病毒感染积分多正常或减低。
3、再生障碍性贫血积分常增高,PNH、MDS积分常减低。
注意事项:
1、血液或骨髓细胞涂片或其他样本均应新鲜,薄厚适宜,及时固定,否则会影响酶的活性。
2、培养细胞染色操作过程中,清洗、染色等步骤都应轻微,以免损伤或丢失细胞。
3、ALP孵育液易失效或降低阳性强度,即配即用,不宜久置。
4、复染时,核固红染色液或甲基绿染色液二者取其一。
5、每次染色时,应有阳性对照片。
有效期:6个月有效。
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