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通用型 ECL 显色试剂盒
本产品是一种灵敏度高的化学发光试剂盒,基本原理是以 luminol 为基础的化学发光;可与二抗上偶联的辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,HRP)发生反应而发光,通过 X-光胶片曝光或其他成像方法(如荧光或化学发光成像仪)进行检测;低浓度样本依然能够检测信号,节省样本;低浓度抗体(一抗、二抗)孵育之后依然能够检测到信号,节省珍贵的抗体;相较于通用型ECL 化学发光试剂盒,信号值至少增强 10 倍,检测灵敏度达到飞克级。
产品组分
A 液
B 液
运输与保存方法
常温运输。频繁使用可置于室温保存,一年稳定;长期不用,建议置于 4 ºC 保存延长效期。
操作方法
使用 CCD 拍照:可以将膜放置于工作液中,开机后按照使用说明,将膜取出,进行拍照。另外,也可以根据情况,调整机器测量参数,提高信噪比。
曝光方法
使用 CCD 拍照:可以将膜放置于工作液中,开机后按照使用说明,将膜取出,进行拍照。另外,也可以根据情况,调整机器测量参数,提高信噪比。
注意事项
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2)转膜、封闭、孵育都需要避免气泡,另外戴手套可以避免在膜上留下手印,保持膜的干净。
3)长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。
4)某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜
5)避免将多张膜置于同一个洗膜盒内洗膜,相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。
6)使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。
7)使用生物素-亲和素系统,避免使用牛奶封闭,可能会导致背景过高。
8)金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点,避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子,建议使用塑料的平头镊子。
9)叠氮*钠(NaN3)能抑制 HRP 活性,若回收 HRP 标记探针或者抗体应避免使用 NaN3,如必需使用勿超过 0.01%。
10)本品无特殊毒性,按普通化学品处理。11) 本产品仅作科研用途!
问题与解决方案
遇到的问题 | 原因分析 | 推荐解决方法 |
胶片无条带显现或者信号较弱 | 转膜的效率低 | 提高转膜效率,用预染 Marker 判断。 |
| 抗原/抗体量少或不匹配 | 增加抗原/抗体量或选择合适抗原/抗体 |
| X 光胶片有问题 | 曝光后 X 光谱全黑(而非透明色),则表明胶片已全曝光,使用新的 X 光片 |
| 显影/定影液有问题 | 可预先曝光一张胶片进行判断,如有问题当换用新的显影/定影液 |
| 反应系统中 HRP 量过多 | 稀释 HRP 标记物 |
X 光片背景脏 | 一抗二抗浓度太高 | 降低抗体浓度,延长封闭时间 |
| 抗体未清洗干净 | 增加洗膜次数 |
条带有空斑 | 抗原以及二抗的浓度过高 | 稀释样品重新跑胶,也可将混合好的显色液冰浴后,加到膜上即刻快速显色。 |
带型不规则 | 转膜有气泡或甲醇(对于PVDF 膜)水化不均匀 | 优化转膜条件。 |
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