金山科研平台授权一级代理,现货促销,欢迎询价
硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX)测试盒
微量法100T/96S
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
TPX属于过氧化物酶家族,在体内主要通过还原过氧化氢和一些氢过氧化物来实现抗氧化作用,功能与GPX类似,也是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。TPX普遍存在于各种生物体内,如酵母、植物、动物、原生动物、寄生虫、细菌和古细菌,在进化上高度保守。TPX与细胞增殖、分化、细胞凋亡及肿瘤发生调控密切相关。TPX的主要功能包括细胞脱毒、抗氧化和调节由过氧化氢介导的信号转导和免疫反应。
测定原理:
TPX催化H2O2氧化二硫苏糖醇(DTT),H2O2的吸收波长为240nm,通过测定240nm吸光度的下降速率,即可计算出TPX活性。
自备仪器和用品:
低温离心机、水浴锅、可调节移液器、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、和蒸馏水
试剂组成和配制:
试剂一:液体120mL×1瓶,室温保存。
试剂二:液体20mL×1瓶,- 20℃保存。
试剂三:液体2mL×1支,4℃。
粗酶液提取:
组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。
细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
血清等液体:直接测定。
TPX测定操作:
取微量石英比色皿或96孔板,加入4 μL上清液,180 μL试剂二,16 μL试剂三,迅速混匀后于240 nm测定10s和130s吸光度,记为A1和A2。
TPX活性计算公式:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义:25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分钟催化1nmol H2O2降解为1个酶活单位。
TPX(nmol/min /mg prot)=(A1-A2)÷ε÷d×V反总÷(Cpr×V样)÷T
=573×(A1-A2)÷Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义:25℃或者37℃中,每克样本每分钟催化1nmol H2O2降解为1个酶活单位。
TPX活性(nmol/min/g 鲜重)=(A1-A2)÷ε÷d×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T
=573×(A1-A2)÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义:25℃或者37℃中,每104个细胞每分钟催化1nmol H2O2降解为1个酶活单位。
TPX活性(nmol/min/104 cell)=(A1-A2)÷ε÷d×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
=573×(A1-A2)÷细胞数量
(4)按液体体积计算
活性单位定义:25℃或者37℃中,每毫升液体每分钟催化1nmol H2O2降解为1个酶活单位。
TPX活性(nmol/min /mL)=(A1-A2)÷ε÷d×V反总÷V样÷T
=573×(A1-A2)
ε:H2O2的摩尔消光系数,43600 L/mol/cm=0.0436 L/μmol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应体系总体积(L),200 μ L=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL);W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),4 μL=4×10-3 mL;V样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间(min),2min。
b.使用96孔板测定的计算公式如下
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义:25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分钟催化1nmol H2O2降解为1个酶活单位。
TPX活性(nmol/min /mg prot)=(A1-A2)÷ε÷d×V反总÷(Cpr×V样)÷T
=1146×(A1-A2)÷Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义:25℃或者37℃中,每克样本每分钟催化1nmol H2O2降解为1个酶活单位。
TPX活性(nmol/min/g 鲜重)=(A1-A2)÷ε÷d×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T
=1146×(A1-A2)÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义:25℃或者37℃中,每104个细胞每分钟催化1nmol H2O2降解为1个酶活单位。
TPX活性(nmol/min/104 cell)=(A1-A2)÷ε÷d×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
=1146×(A1-A2)÷细胞数量
(4)按液体体积计算
活性单位定义:25℃或者37℃中,每毫升液体每分钟催化1nmol H2O2降解为1个酶活单位。
TPX活性(nmol/min /mL)=(A1-A2)÷ε÷d×V反总÷V样÷T
=1146×(A1-A2)
ε:H2O2的摩尔消光系数,43600 L/mol/cm=0.0436 L/μmol/cm;d:96孔板光径,0.5cm;V反总:反应体系总体积(L),200 μL=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL);W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),4 μ L=4×10-3 mL;V样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间(min),2min。
金山禾斗石斗平台
国内试剂耗材经销代理。
国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。
提供加急物流处理,进口货物,最快交期1-2周。
进出口货物代理服务。
公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重点合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。
质量保证,所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式"服务模式,为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源,加强网络建设,提高公司内部运作效率,为客户提供方便、快捷的服务。
公司突出创新思维,提高工作效能,减低运作成本,为客户提供优惠的价格。
硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX)测试盒
©
bio-rad伯乐一级代理 |伯乐Aminex |伯乐电泳槽1658001| 伯乐ddPCR bio-rad授权代理商、biorad伯乐qpcr仪是专业的授权总代理区域代理经销平台。
© 如需询价,请加客服QQ:1749072012 、客服微信:jinshanbio,或发送邮件到1749072012@qq.com
© 平台为生命科学研究相关领域提供一站式耗材试剂仪器解决方案和采购服务,数据资源基于CC协议。
© 本文地址:
https://gibcohyclone.cn/thread-21145.htm