天冬氨酸氨基转氨酶(GOT/AST)测试盒-试剂盒

2024-07-24

金山科研平台授权一级代理,现货促销,欢迎询价

谷草转氨酶/天冬氨酸氨基转氨酶(GOT/AST)测试盒

微量法 100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

GOT(2.6.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化可逆转氨基反应,是氨基酸代谢的重要酶。此外,GOT在心肌细胞中含量最高,临床上一般常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查。肝脏损害时其血清浓度也可升高。

测定原理

GOT催化α-同戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应,生成谷氨酸和草酰乙酸,草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸;丙酮酸可与2,4-二硝*苯肼反应生成2,4-二硝*苯腙,在碱性条件下显棕红色;测定505nm吸光度的变化,即可计算GOT酶活力。

需自备的仪器和用品

可见分光光计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体2.5mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:液体2.5mL×1瓶,4℃保存;

试剂三:液体25mL×1瓶,4℃保存;

样品测定的准备

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

测定操作表

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至505nm,蒸馏水调零。

  2. 在EP管或在96孔板中加入下列试剂

试剂名称(μL)

测定管

对照管

待测样本

10

煮沸10min的待测样本

10

试剂一

25

蒸馏水

25

混匀后,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)准确反应20min

试剂二

25

25

混匀后,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)准确反应20min

试剂三

240

240

混匀,室温(25℃)放置10min,505nm波长处测各管吸光度A。ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。

计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定的回归曲线,y = 0.4768x-0.0013(x为标准品浓度,umol/mL;y为ΔA)。

2、血清(浆)GOT活力的计算

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GOT(nmol/min/mL)=(ΔA+0.0013)÷0.4768÷T×103=104.9×(ΔA+0.0013)

3、细胞、细菌和组织中GOT活力的计算

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GOT(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0013)÷0.4786×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103=104.9×(ΔA+0.0013)÷Cpr

需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GOT(nmol/min/g鲜重)=[(ΔA+0.0013)÷0.4768×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103=104.9×(ΔA+0.0013)÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GOT(nmol/min/104cell)=[(ΔA+0.0013)÷0.4768×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103=0.21×(ΔA+0.0013)

V1:加入反应体系中样本体积,0.01mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,20min;Cpr:蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万;103:1umol/mL=103nmol/mL。

b.使用96孔板测定的计算公式如下:

1、标准条件下测定的回归曲线,y = 0.2384x-0.0013(x为标准品浓度,umol/mL;y为ΔA)。

2、血清(浆)GOT活力的计算

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GOT(nmol/min/mL)=(ΔA+0.0013)÷0.2384÷T×103=209.7×(ΔA+0.0013)

3、细胞、细菌和组织中GOT活力的计算

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GOT(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0013)÷0.2384×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103=209.7×(ΔA+0.0013)÷Cpr

需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GOT(nmol/min/g鲜重)=[(ΔA+0.0013)÷0.2384×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103=209.7×(ΔA+0.0013)÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

GOT(nmol/min/104cell)= [(ΔA+0.0013)÷0.2384×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103=0.419×(ΔA+0.0013)

V1:加入反应体系中样本体积,0.01mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,20min;Cpr:蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万;103:1umol/mL=103nmol/mL。

  1. 标准曲线线性范围为:0.01umol/mL-2umol/mL。

  2. ΔA线性范围为:0.01-1。

金山禾斗石斗平台

  1. 国内试剂耗材经销代理。

  2. 国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。

  3. 提供加急物流处理,进口货物,最快交期1-2周。

  4. 进出口货物代理服务。

  5. 公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重点合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

  6. 质量保证,所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式"服务模式,为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源,加强网络建设,提高公司内部运作效率,为客户提供方便、快捷的服务。

  7. 公司突出创新思维,提高工作效能,减低运作成本,为客户提供优惠的价格。

谷草转氨酶/天冬氨酸氨基转氨酶(GOT/AST)测试盒

© bio-rad伯乐一级代理 |伯乐Aminex |伯乐电泳槽1658001| 伯乐ddPCR bio-rad授权代理商、biorad伯乐qpcr仪是专业的授权总代理区域代理经销平台。
© 如需询价,请加客服QQ:1749072012 、客服微信:jinshanbio,或发送邮件到1749072012@qq.com
© 平台为生命科学研究相关领域提供一站式耗材试剂仪器解决方案和采购服务,数据资源基于CC协议。
© 本文地址:https://gibcohyclone.cn/thread-21205.htm
产品询价需求提交
返回
扫码添加客服微信,咨询产品报价