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山梨醇含量测试盒
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
山梨醇广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,不仅是糖运输形式之一,而且与生物抗逆性和食物风味密切相关。因此,在糖代谢、抗逆性和食品研究中经常需要检测山梨醇含量变化。
测定原理:
山梨醇在碱性溶液中与铜离子形成蓝色络合物,在655nm波长有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体3.5mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体3.5mL×1瓶,4℃保存。
山梨醇的提取:
按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL蒸馏水),研磨成匀浆,95℃水浴10分钟(盖紧,以防止水分散失),冷却后,8000g,25℃离心10min,取上清液待测。
测定步骤
分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至655nm,蒸馏水调零。
2、加样表(在EP管中依次加入下列试剂):
试剂(μL) | 空白管 | 测定管 |
试剂一 | 35 | 35 |
试剂二 | 35 | 35 |
样本 | | 230 |
蒸馏水 | 230 | |
混匀后室温静置15min,8000g,25℃离心10min,取200μL上清液至微量石英比色皿或96孔板中,测655nm下吸光值A,计算ΔA=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。
山梨醇含量计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为y = 0.352x - 0.002;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。
2、按照样品质量计算
山梨醇含量(mg /g 鲜重)=[(ΔA+0.002)÷0.352×V1]÷(W×V1÷V2)=2.84×(ΔA+0.002)÷W
3、按照样本蛋白浓度计算
山梨醇含量(mg /mg prot)=[(ΔA+0.002) ÷0.352×V1]÷(V1×Cpr)=2.84×(ΔA+0.002) ÷Cpr
V1:加入样本体积,0.23mL;V2:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为y = 0.176x - 0.002;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。
2、按照样品质量计算
山梨醇含量(mg /g 鲜重)=[(ΔA+0.002)÷0.176×V1]÷(W×V1÷V2)=5.68×(ΔA+0.002)÷W
3、按照样本蛋白浓度计算
山梨醇含量(mg /mg prot)=[(ΔA+0.002) ÷0.176×V1]÷(V1×Cpr)=5.68×(ΔA+0.002) ÷Cpr
V1:加入样本体积,0.23mL;V2:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
注意:*低检测限为1μg/g鲜重或0.01μg /mg prot
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