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土壤多酚氧化酶（SPPO）检测试剂盒

测定意义：

S-PPO 主要来源于土壤微生物、植物根系分泌物及动植物残体分解释放，催化土壤中芳香族化合物氧化成

醌，醌与土壤中蛋白质、氨基酸、糖类、矿物等物质反应生成有机质和色素，完成土壤芳香族化合物循环，

用于土壤环境修复。

测定原理：

S-PPO 能够催化邻苯三酚产生有色物质，后者在 430nm 有特征光吸收。

自备用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、yi醚 50mL（不

允许快递）和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：粉剂×2 瓶，4℃保存；临用前取一瓶，加入 7mL 蒸馏水充分溶解后待用；用不完的试剂 4℃保存

一周。

试剂二：液体 6mL×1 瓶，4℃保存；

试剂三：yi醚 50mL×1 瓶，4℃保存；（自备）

样品处理：

新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干，过 30~50 目筛。

测定步骤：

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 430nm，蒸馏水调零。

2、 加样表

振荡数次，室温静置 30min，取 200μL 上层液于 430nm 处测定吸光值 A。

（注意：1、因yi醚粘度小，易掉液，吸取前需先将枪头在上层液里润洗 2~3 次，再转移测定；2、yi醚易

挥发，转移到 96 孔板后立即测定，最好一个一个测定）。

S-PPO 活力计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为 y = 8.97x -0.003；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值 A。

单位的定义：每天每 g 土样中产生 1mg 紫色没食子素定义为一个酶活力单位。

S-PPO 活力（mg /d/g 土样）＝(A+0.003) ÷8.97×V 反总÷W÷T=80×(A+0.003)

T：反应时间，1h=1/24d； V 反总：反应体系总体积 0.6mL；W：样本质量，0.02g。

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为 y = 4.485x -0.003；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值 A。

单位的定义：每天每 g 土样中产生 1mg 紫色没食子素定义为一个酶活力单位。

S-PPO 活力（mg/d/g 土样）＝(A+0.003) ÷4.485×V 反总÷W÷T=160×(A+0.003)

T：反应时间，1h=1/24d； V 反总：反应体系总体积 0.6mL；W：样本质量，0.02g。

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