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土壤亮氨酸氨基肽酶(SLAP)测试盒
微量法100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
S-LAP是一类能水解肽链N-末端为亮氨酸的酶,由土壤微生物分泌。S-LAP活性变化与机体某些病理状态密切相关。
测定原理:
S-LAP分解L-亮氨酰对硝基苯胺生成对硝基苯胺,后者在405nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算S-LAP活性。
自备用品:
酶标仪/可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体35mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存;
S-LAP测定步骤:
分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至405nm,蒸馏水调零。
在试剂二瓶中加入15mL试剂一充分溶解(如较难溶解,可60℃水浴加热约30min促进溶解);用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
操作表
试剂名称 | 对照管 | 测定管 |
新鲜土样(g) | 0.05 | 0.05 |
试剂一(μL) | 300 | |
试剂二(μL) | | 300 |
混匀,37℃振荡反应1h后,8000g 4℃离心10min,取200μL上清液于微量石英比色皿或96孔板中,405nm处测定吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
S-LAP活力单位的计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
单位的定义:每天每g土样每天生成1 μmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
S-LAP(μmol/d/g 土样)=ΔA×V反总÷(ε×d)×106÷W÷T=14.8×ΔA
V反总:反应体系总体积,3×10-4L;ε:对硝基苯胺摩尔消光系数,9.72×103L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;T:反应时间,1h=1/24d;W:样本质量,0.05g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
单位的定义:每天每g土样每天生成1 μmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
S-LAP(μmol/d/g 土样)=ΔA×V反总÷(ε×d)×106÷W÷T=29.6×ΔA
V反总:反应体系总体积,3×10-4L;ε:对硝基苯胺摩尔消光系数,9.72×103L / mol /cm;d:比色皿光径,0.5cm;T:反应时间,1h=1/24d;W:样本质量,0.05g。
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