土壤中性蛋白酶(SNPT)测试盒-试剂盒

2024-07-24

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土壤中性蛋白酶(SNPT)测试盒

微量法 100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化,其水解产物是高等植物的氮源之一。S-NPT在中性环境下催化蛋白质水解,与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。

测定原理:

中性条件下,S-NPT可将酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在680nm有特征吸收峰。

实验中所需仪器及设备:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板、双蒸水

试剂组成和配置:

试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入6ml蒸馏水充分溶解;用不完的试剂4℃保存;

试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入2mL试剂七,沸水浴加热溶解,然后加入8ml试剂一,充分混匀备用,用不完的试剂4℃保存;

试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入30ml蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂4℃保存;

试剂五:液体8mL×1瓶,4℃保存;

试剂六:液体1.5mL×1支,0.05mg/ml标准酪氨酸溶液,4℃保存;

试剂七:液体5mL×1瓶,4℃保存;

样品处理:

新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。

测定操作:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至680nm,蒸馏水调零。

2、样本测定:

试剂名称

测定管

对照管

风干土样(g)

0.02

0.02

试剂一(μL)

150

试剂三(μL)

150

混匀后,40℃水浴30min,振荡5-6次,使土样与反应液充分接触

试剂二(μL)

50

50

混匀,8000g 25℃离心10min,取上清液,在EP管中加入下列试剂

测定管

对照管

标准管

上清液(μL)

60

60

试剂六(μL)

60

试剂四(μL)

280

280

280

试剂五(μL)

60

60

60

混匀,40℃水浴20min,8000g 25℃离心10min,取上清液200μL,680nm下读取各管吸光值A

注意:标准管只需测一次。每个测定管设一个对照管。

S-NPT活性计算:

单位定义:每天每g土样中产生1mg酪氨酸为一个S-NPT活力单位。

S-NPT(mg/d/g土样)=C标准×(A测定管-A对照管)÷A标准管×V反总÷W÷T=24×(A测定管-A对照管)÷A标准管

C标准管:标准管浓度,0.05mg/mL;V反总:反应体系总体积,0.4mL;T:反应时间,30min=1/48d;W:样本质量,0.02g。

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