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3-磷酸甘油酸激酶（3-Phosphoglycerate kinase，PGK）

3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的关键酶，广泛存在于动植物和微生物体内，催化1，3-二磷酸甘油酸转变为3-磷酸甘油酸，产生1分子ATP，具有影响DNA复制和修补及刺激病毒RNA合成等生物学功能，广泛应用于药物靶标设计。

测定原理

3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP产生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脱氢酶和NADH作用下产生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，340nm处的吸光度变化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。

试剂组成和配制

提取液：液体100mL×2瓶，4℃保存。

试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加2mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：粉剂×1支，-20℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂四：粉剂×1支，-20℃避光保存。临用前加1 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂五：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加4 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

酶液提取

①总PGK酶提取：建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，500g离心5min，取上清测定。

②胞浆和叶绿体PGK酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5～10的比例（建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液），冰浴匀浆后于4℃，500g离心5min，弃沉淀，取上清在4℃，8000g离心10min，取上清用于测定胞浆PGK酶活性，取沉淀加1mL提取液，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，500g离心5min，取上清测定叶绿体中PGK酶活性。

建议测定总PGK酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的PGK，则按照步骤②提取粗酶液。

操作

1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2. 取微量石英比色皿/96孔板，依次加入100μL试剂一，20μL试剂二，10μL试剂三，10μL试剂四，40μL试剂五，20μL粗酶液，充分混匀，记录340nm处10s的吸光值A1和310s的吸光值A2，△A=A1-A2

自备用品

天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。

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3-磷酸甘油酸激酶（3-Phosphoglycerate kinase，PGK）

• 中文名称：甲泛葡胺

• 英文名称：Metrizamide

分子式：C18H22I3N3O8

分子量：789.1

• CAS号：31112-62-6

  级别：Reagent Grade

• EINECS编号：250-475-5

• 储存条件：2～8℃

• 中文别名：甲泛葡胺、阿米派克、甲泛影酰胺、室椎影

• 英文别名：2-((3-(acetylamino)-5-(acetylmethylamino)-2,4,6-triiodobenzoyl)amino)-2-deox、2-(3-ace***ido-2,4,6-triiodo-5-(n-methylace***ido)benzamido)-2-deoxy-d-gluco

• 是否危险：否

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