12391Qiagen EndoFree Plasmid Giga Kit (5)

2024-07-28

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Qiagen EndoFree Plasmid Giga Kit (5)货  号:12391产品规格:5原 产 地:德国产品详细信息EndoFree Plasmid Giga Kit (5)

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Qiagen EndoFree Plasmid Giga Kit (5)

纯化得到至多10mg的无内毒素高转染级纯质粒或柯斯质粒DNA

  • 纯化得到的DNA内毒素水平低于0.1 EU/µg

  • 纯化流程快,同时去除内毒素

  • 获得高产量、高拷贝质粒DNA

  • 使用LyseBlue,获得的裂解和高产量的DNA

EndoFree Plasmid Kits基于阴离子交换技术,可快速制备不含内毒素的质粒DNA。QIAfilter Cartridges过滤快速澄清裂解液,DNA的产量500μg(Maxi)、2.5mg(Mega)和10mg(Giga)。制备的DNA 纯度超过两次CsCl梯度离心法所得DNA的纯度,适合超转染级纯的应用。

原理

纯化的质粒DNA内毒素污染水平取决于所用的纯化方法(参见"Endotoxin levels in plasmid preparations")。硅胶技术纯化的DNA具有非常高的内毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和两次CsCl超速离心可获得相对低水平内毒素的纯DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的内毒素去除步骤,获得<0.1EU/µg的质粒DNA。

QIAfilter、HiSpeed和EndoFree Plasmid Kits提供的QIAfilter Cartridges是特殊设计的过滤装置,用于代替细菌细胞碱裂解后的离心步骤。QIAfilter Cartridges可wanquan去除SDS沉淀,清除细菌裂解液,相比离心可大量节约时间,减少1小时的质粒纯化时间。QIAfilter Mega-Giga Cartridges采用内部真空方式轻松高效的清除大量细菌裂解液(注意:该试剂盒不包含瓶子)。

QIAGEN-tips中dute的阴离子交换树脂(不提供EndoFree Plasmid Buffer Set)专为核酸纯化而开发。它的分离性能使得DNA纯度与连续两次CsCl梯度离心获得的DNA纯度相当。由重力流驱动并持续运转的预装 QIAGEN-tips,限度减少手动制备质粒所需的时间。整个QIAGEN质粒纯化系统不使用有毒物质,如benfen,氯仿,溴化乙锭和CsCl,限 度地减少对用户和环境的危害。

内毒素,又称脂多糖或LPS,是大肠杆菌等革兰氏阴性菌细胞膜的组成部分,如大肠杆菌(参见Bacterial cell wall)。 内毒素在质粒裂解纯化过程中释放出来,并显著降低内毒素敏感细胞株的转染效率。此外,内毒素与DNA竞争“自由"转染试剂,影响转染实验中质粒DNA的摄 取。内毒素也诱导巨噬细胞和B细胞等免疫细胞发生非特异性免疫反应,从而导致转染结果的误读。这些反应包括诱导的蛋白质和脂类,如IL-1和前列腺素等的 合成。总体而言,内毒素在转染实验中是不可控变量,影响结果的可重复性,使它们难以对比、解读。在基因治疗研究中,内毒素可造成内毒素休克综合症和激活补 体级联,干扰研究。

Qiagen EndoFree Plasmid Giga Kit (5)

操作流程

在碱性条件下,细菌细胞裂解,使用QIAfilter Mega-Giga Cartridge清除粗裂解物。将Endotoxin Removal Buffer加入到过滤后的裂解液中。冰浴后,将纯净的裂解物上样到阴离子交换柱上,在适当的低盐和pH条件下,质粒DNA选择性结合。用中盐缓冲液清除 RNA、蛋白质、代谢产物和其他低分子量杂质,超纯质粒DNA被高盐缓冲液洗脱(参见QIAGEN Plasmid Kit procedures)。最后DNA由异丙醇脱盐、沉淀并且离心回收。

应用

使用EndoFree Plasmid Kits纯化的DNA适合多种敏感应用,包括:

  • 转染,包括原代、敏感以及悬浮细胞

  • 基因治疗研究

  • 基因沉默

  • 显微注射

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