Cisbio激酶、GPCR、代谢、免疫标记试剂HTRF®技术
HTRF®是均相时间分辨荧光技术的简称,HTRF®技术是对TR-FRET技术的进一步改良,提供了更高的灵敏度和稳定性,为法国Cisbio公司的zhuanli技术。
Cisbio Bioassays是一家超过50年历史的生命科学、医疗诊断和药物研发公司,最初在体外诊断方面的成就提供了丰富的免疫化验的经验,这方面的经验与Jean-Marie Lehn 教授(1987年诺贝尔化学奖得主)在稀土荧光特性方面研究合作,造就了如今的HTRF技术。如今,HTRF®在药物发现领域成为了*受欢迎的方法之一。全球各大制药企业、药物研究所和新药筛选中心都将HTRF®作为重要的化合物筛选方法进行药物研发。
Cisbio Bioassays公司主要提供基于HTRF®技术的完备整套产品,涉及药物筛选、疾病诊断、免疫学分析等多个方面,包括激酶、GPCR、代谢、免疫标记试剂等。在全球高通量筛选领域(HTS),Cisbio公司占据了TR-FRET市场的主导份额。
我们作为Cisbio Bioassays公司的代理商为客户提供,正规进口,保证原装正品,货期稳定,折扣好的服务标准。
Cisbio Bioassays公司部分产品简介:
HTRF®技术: 免洗的Elisa,传统Elisa的替代技术,跟传统的Elisa有wuyulunbi的优势:
操作非常简单:空板直接加样,加完即可检测。
体系非常稳定:7天之内可随时检测,信号基本不变。
数据客观真实:可有效去除背景荧光,假阳性率、假阴性率低。
HTRF®原理
HTRF®(均相时间分辨荧光,Homogeneous Time-Resolved Fluorescence )是一种用来检测纯液相体系中待测物的技术。该技术结合了荧光共振能量转移(FRET,Fluorescence Resonance Energy Transfer) 和时间分辨荧光 (TRF, Time-Resolved Fluorescence))两大技术。
荧光共振能量转移(FRET)
利用两种荧光基团,分别称为能量供体(Donor)和能量受体(Acceptor)。在供体和受体相互靠近时,能量从供体转移到受体上,并使后者发出荧光。
由于受体分子的发射光来自于能量转移,所以在实验中无需包被、无需将未结合与已结合的分子分开,即无需洗涤步骤。
时间分辨荧光(TRF)
利用稀土元素中镧系元素的*性质,其荧光比普通荧光持续时间更长。普通荧光的半衰期为纳秒级,镧系元素的半衰期为毫秒级,有6个数量级的差别。所以在检测时,TRF有一个时间延迟-50微秒,从而使普通背景荧光信号几乎为零。因此TRF的背景非常低,反映样品实际情况。
HTRF®的技术创新点
HTRF®的能量供体是铕(Eu3+)和铽(Tb2+)的穴状化合物(如右图)。在穴状化合物里,Eu和Tb被yongjiu地嵌合在一个笼子中,结构非常稳定,对温度、PH值、金属离子、螯合物等耐受性*。
HTRF®的能量受体为XL665和d2。两者激发波长为620 nm,发射波长为665 nm。XL665是改良过的别藻蓝蛋白(APC),其将APC的亚基偶联,使其不能解离,增加了稳定性。d2是第二代受体,光谱学特征与XL665相同,但分子量较小,约为1KD,可减少空间位阻对实验的可能影响。
HTRF®的操作步骤
HTRF®的操作步骤非常简单,只需要将实验所需试剂加进去,然后孵育、检测即可
HTRF®的数据分析
HTRF®采用了比值法来处理数据,可以去除由于溶液通透率、细胞大小、细胞数量不同引起的误差。
HTRF®的应用范围
G蛋白偶联受体研究:受体第二信使检测 受体配体结合 胞内信号分子检测
激酶活性检测:胞外激酶活性检测 胞内激酶活性检测
生物标志物检测:基于抗体的夹心法和竞争法检测
抗体检测:抗体重链含量测定、抗体轻链含量测定
生物过程分析:GST含量测定、HIS含量测定、CHO宿主蛋白含量测定
免疫过程分析:CD16结合检测、CD32结合检测、CD64结合检测
相互作用分析:蛋白-蛋白、蛋白-多肽、蛋白-DNA、蛋白-RNA
蛋白修饰:蛋白甲基化、蛋白乙酰化、蛋白泛素化、蛋白水解
试剂盒 | 应用 | |
激酶(Kinase) | STK | 1、丝氨酸、苏氨酸激酶活性检测 2、抑制剂或激动剂的筛选 |
TK | 1、酪氨酸激酶活性检测 2、抑制剂或激动剂的筛选 |
ADP Transcreener | 激酶、ATP酶活性检测,以及反应中生成ADP的定量 |
G蛋白偶联受体 (GPCR) | cAMP | 1、Gs,Gi类受体激动剂和拮抗剂的筛选 2、PDE酶活性的检测 3、腺苷酸环化酶活性检测 4、受体活性检测 |
IP-One | 1、Gq类受体活性检测 2、受体激动剂和拮抗剂,别构调节剂以及反向激动剂筛选 3、缓慢激动剂的检测 |
IP-One Elisa | 针对科研用户推出的传统的Elisa方法 1、PLC相关受体的活性检测 2、验证GPCR功能 |
Tag-lite | 1、替代同位素做受体配体结合试验2、受体的二聚化试验 2、受体的二聚化实验 |
磷酸化蛋白 | pERK | 1、AKT/MAPK通路研究 2、细胞表面受体研究 |
pAKT | 1、AKT/MAPK通路研究 2、细胞表面受体研究 |
生物标记物 (Kinase) | Amyloid beta1-40 | 1、Amyloid beta1-40 peptide定量 2、分泌酶活性检测 |
Apo A1 | 1、载脂蛋白A1定量 2、核受体活性检测 |
Apo B | 1、载脂蛋白B定量 2、核受体活性检测 |
cGMP | 1、cGMP定量 2、PDE酶活性检测 3、鸟苷酸环化酶活性检测 4、受体活性检测 |
Cortisol | 1、Cortisol定量 2、11β-HSD1活性检测 |
Estradiol | l、Estradiol定量 2、17β-HSD1活性检测 |
Histamine | Histamine定量 |
Insulin | Insulin定量 |
PEG2 | PGE2定量 |
Sirt1 | Sirt1酶活性检测 |
抗体定量 | Total IgG | 1、IgG定量 2、带Fc标签蛋白定量 3、人源化抗体筛选 4、抗体生产时的质控 |
Kappa Mab | 1、含Kappa轻链抗体的定量 2、抗体生产时的质控 |
Lamda Mab | 1、含Lamda轻链抗体的定量 2、抗体生产时的质控 |
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