Percoll的使用注意事项

2024-08-08

  Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低(<20mosm/kg H2O), 粘度也很小,可形成高达1.3g/ml密度,采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200~1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于Percoll扩散常数低,所形成的梯度十分稳定。此外,Percoll不穿透生物膜,对细胞无毒害,因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒,还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。

  该法是纯化淋巴细胞和单核细胞的一种较好的方法,淋巴细胞纯度高达98%,单核细胞纯度可达78%。因为Percoll具有渗透性低、不穿透细胞、粘度低、密度高和无毒害等优点,与目前常用的密度梯度离心介质,包括蔗糖(Sucrose)、血清白蛋白(Serum albumin, ALB)、聚蔗糖(Ficoll)、氯化铯(CsCl)等相比,是目前较理想的介质。Percoll密度梯度离心已被多次成功地用于动物细胞及其细胞器的分离,纯化了包括人血液细胞、骨髓细胞、红血球细胞、白血球细胞、淋巴细胞、肝细胞等在内的十余种动物细胞。这一技术也开始用于用于分离和纯化植物原生质体、核、叶绿体和线粒体。

  Percoll的使用注意事项

  A. 本分离液是敏光型的,在运输和贮藏过程中应在18℃-25℃避光保存,启封后置4℃保存避免微生物污染。另外,本品为真空包装,未启封前置于10℃ 以下易出现白色结晶,影响分离效果。

  B. 待分离的样本要求新鲜,避免冷冻和冷藏。分离液和所分离样本一定在20℃水浴箱中复温20 分钟保证分离液和所分离样本温度在20℃±2℃时分离效果好,且所有操作过程一定要在无菌条件下进行。

  C. 由于各品牌离心机的性能不同,国内南北地区温度环境和四季的差异,可能影响分离效果,用户可以调节离心转数,调节离心的时间,摸索佳的分离条件(具体分离条件各实验室自定)。

  D. 使用无静电反应的离心管,推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。

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