伯乐:快速半干转Turbo操作指南

2023-12-07

蛋白转印所需试剂耗材

1. 1×转膜缓冲液(1×Transfer Buffer)

2. 膜(PVDF膜/NC膜)

3. 滤纸(2.4mm,非湿转滤纸0.84mm)

注:甲醇(激活PVDF膜),无水乙醇(配置1×转膜缓冲液)

试剂耗材货号

试剂耗材货号(仅列举部分):

1.Trans-Blot Turbo 5× Transfer Buffer #10026938

2.Immun-Blot PVDF Membrane, 26 cm × 3.3 m, 1 roll #1620177

3.Extra Thick Blot Filter Paper, Precut, 7 × 8.4 cm #1703966

实验室配置转膜缓冲液

实验室配置1×半干转缓冲液

Bjerrum与Schfer-Nielsen SDS 缓冲液配方:

48mM Tris,39mM甘氨酸,20%(v/v)甲醇,1.3mM SDS(pH 9.2)

1L缓冲液中各物质用量:

5.82g Tris,2.93g甘氨酸,3.75ml 10%SDS(或0.375g SDS),甲醇200ml。

缓冲液建议用去离子水配制,甲醇最后加,不需调整缓冲液pH值。

注:商品化配方有利于新手操作,降低时间成本,个人配置转膜液,滤纸平衡时间延长。

01 实验准备工作

1. 配置1×转膜缓冲液(建议现配现用)配方如下

注:5× Transfer Buffer转膜需要稀释成1×Transfer Buffer,按照顺序添加,混合均匀,放4℃预冷后使用,效果更佳。

2. 放膜顺序(从下往上依次堆叠,和湿转理论放置顺序一样,操作方向相反,不要放错)

转印槽(阳极)—滤纸—NC膜/PVDF膜(甲醇激活)—SDS-PAGE胶—滤纸—转印盖(阴极)

注:①滤纸浸泡10min,1×转膜缓冲液约75ml;做的多且频繁,可以1×转膜缓冲液配置500ml放4℃冰箱短期内使用。

②每铺一层使用滚轮赶气泡(不要特别用力将缓冲液从滤纸中挤出)。

③盖上转印盖并旋转上锁,将装配无误的转印卡槽插入Trans-Blot Turbo中开始实验。

02仪器操作

以手灌胶为主介绍(购买商品化预混液制备的SDS-PAGE胶)

1.主机自带电源,打开开关,等待出现Home屏。

2.设置程序(使用新建程序:NEW)

1块小型胶:25V,1.3A,12min(恒流限压);

2块小型胶/1块中型胶:25V,2.5A,12min(恒流限压);

选择A槽或B槽,点击RUN运行程序。

注:①仪器分为A槽和B槽(仪器有标记),每槽同时可装1-2块小型凝胶(7x8.5cm),1块中型凝胶(13.3x8.7cm)。

②A槽和B槽同时使用,设置1种程序(电流,电压和时间必须一致)。

③经典转印时间7-10min。商品化试剂可以做到3min。转膜时间根据蛋白大小决定,不超过30min,推荐程序设置7-10min,可以在此基础上摸索。

3.实验结束,用清水清洗转印槽、槽盖,并用纸巾擦干。


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