蛋白转印所需试剂耗材

1. 1×转膜缓冲液（1×Transfer Buffer）

2. 膜（PVDF膜/NC膜）

3. 滤纸（2.4mm，非湿转滤纸0.84mm）

注：甲醇（激活PVDF膜），无水乙醇（配置1×转膜缓冲液）

试剂耗材货号

试剂耗材货号（仅列举部分）：

1.Trans-Blot Turbo 5× Transfer Buffer #10026938

2.Immun-Blot PVDF Membrane, 26 cm × 3.3 m, 1 roll #1620177

3.Extra Thick Blot Filter Paper, Precut, 7 × 8.4 cm #1703966

实验室配置转膜缓冲液

实验室配置1×半干转缓冲液

Bjerrum与Schfer-Nielsen SDS 缓冲液配方：

48mM Tris，39mM甘氨酸，20%（v/v）甲醇，1.3mM SDS（pH 9.2）

1L缓冲液中各物质用量：

5.82g Tris，2.93g甘氨酸，3.75ml 10%SDS（或0.375g SDS），甲醇200ml。

缓冲液建议用去离子水配制，甲醇最后加，不需调整缓冲液pH值。

注：商品化配方有利于新手操作，降低时间成本，个人配置转膜液，滤纸平衡时间延长。

01 实验准备工作

1. 配置1×转膜缓冲液（建议现配现用）配方如下

注：5× Transfer Buffer转膜需要稀释成1×Transfer Buffer，按照顺序添加，混合均匀，放4℃预冷后使用，效果更佳。

2. 放膜顺序（从下往上依次堆叠，和湿转理论放置顺序一样，操作方向相反，不要放错）

转印槽（阳极）—滤纸—NC膜/PVDF膜（甲醇激活）—SDS-PAGE胶—滤纸—转印盖（阴极）

注：①滤纸浸泡10min，1×转膜缓冲液约75ml；做的多且频繁，可以1×转膜缓冲液配置500ml放4℃冰箱短期内使用。

②每铺一层使用滚轮赶气泡（不要特别用力将缓冲液从滤纸中挤出）。

③盖上转印盖并旋转上锁，将装配无误的转印卡槽插入Trans-Blot Turbo中开始实验。

02仪器操作

以手灌胶为主介绍（购买商品化预混液制备的SDS-PAGE胶）

1.主机自带电源，打开开关，等待出现Home屏。

2.设置程序（使用新建程序：NEW）

1块小型胶：25V，1.3A，12min（恒流限压）；

2块小型胶/1块中型胶:25V，2.5A，12min（恒流限压）；

选择A槽或B槽，点击RUN运行程序。

注：①仪器分为A槽和B槽（仪器有标记），每槽同时可装1-2块小型凝胶（7x8.5cm），1块中型凝胶（13.3x8.7cm）。

②A槽和B槽同时使用，设置1种程序（电流，电压和时间必须一致）。

③经典转印时间7-10min。商品化试剂可以做到3min。转膜时间根据蛋白大小决定，不超过30min，推荐程序设置7-10min，可以在此基础上摸索。

3.实验结束，用清水清洗转印槽、槽盖，并用纸巾擦干。