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植酸酶测试盒
微量法100T/48S
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
植酸酶（phytase）是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸（盐）的一类酶的总称，属磷酸单酯水解酶，它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷，降低粪便中的磷含量，减轻对环境的污染，改善营养成分的吸收和利用，因此具有极其广泛的研究和应用价值。
测定原理
植酸酶在一定温度和pH值条件下，水解底物植酸钠生成无机磷与肌醇衍生物，无机磷在酸性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色复合物，在700nm处有特征吸收峰，根据700nm处吸光值变化可计算得植酸酶活性。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅，超声溶解器，回旋式振荡器。
试剂组成和配制
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
缓冲液：液体15mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1支，4℃保存，临用前加缓冲液6mL配制，现用现配；用不完的试剂4℃保存一个月。
试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存。
显色剂：粉剂×8瓶，4℃保存，临用前根据用量每瓶加0.4mL双蒸水溶解，再加1.6mL试剂二混匀。
样本处理
酶制剂：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：500~1000的比例（建议称取约0.001g，加入1mL提取液）加入提取液，在超声波溶解器上溶解15min，再用回旋式振荡器振荡15min，待测。
组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，在超声波溶解器上溶解15min，再用回旋式振荡器振荡15min，4℃，4000g离心10min，取上清待测。
饲料样品：饲料烘干粉碎，过40目筛，按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，在超声波溶解器上溶解15min，再用回旋式振荡器振荡15min，4℃，4000g离心10min，取上清待测。
培养液等液体样品，混匀直接测定。
测定操作表
| 对照管 | 测定管 |
样本（µL） | 30 | 30 |
37℃温育5min |
缓冲液（µL） | 120 | |
试剂一（µL） | | 120 |
混匀，37℃温育30min |
95℃，10min终止反应，冷却至室温 |
显色剂（µL） | 150 | 150 |
混匀，37℃静置15min，10000g，室温，离心5min，取上清200µL，测定700nm处吸光值，△A=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。 |
酶活性计算公式
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.2764x + 0.0082，R2= 0.9998；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值。
按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在37℃，pH5.5的条件下，每毫克蛋白每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。
植酸酶活性（μmol/min/mg prot）=（△A-0.0082）÷0.2764÷Cpr÷T=0.1206×（△A-0.0082）÷Cpr2．按照样本质量计算
酶活性定义：在37℃，pH5.5的条件下，每克样本每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。
植酸酶活性（μmol/min /g鲜重）=（△A-0.0082）÷0.2764÷W÷T=0.1206×（△A-0.0082）÷W
3. 培养液等液体样品
酶活性定义：在37℃，pH5.5的条件下，每毫升液体每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。
植酸酶活性（μmol/min /mL）=（△A-0.0082）÷0.2764÷T=0.1206×（△A-0.0082）
Cpr：样本蛋白含量，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，30min。
b. 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.1382x + 0.0082，R2= 0.9998；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值。
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在37℃，pH5.5的条件下，每毫克蛋白每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。
植酸酶活性（μmol/min/mg prot）=（△A-0.0082）÷0.1382÷Cpr÷T= 0.2412×（△A-0.0082）÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：在37℃，pH5.5的条件下，每克样本每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。
植酸酶活性（μmol/min /g鲜重）=（△A-0.0082）÷0.1382÷W÷T=0.2412×（△A-0.0082）÷W
3. 培养液等液体样品
酶活性定义：在37℃，pH5.5的条件下，每毫升液体每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。
植酸酶活性（μmol/min /mL）=（△A-0.0082）÷0.1382÷T=0.2412×（△A-0.0082）
Cpr：样本蛋白含量，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，30min。
注意事项
1、显色剂需要临用前根据用量配制，每一瓶是13个样本的用量，新配制的显色剂若有颜色则已经污染或者试剂过期，应放弃使用。
2、ΔA线性范围为0.01-1。
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