金山科研平台授权一级代理,现货促销,欢迎询价
果糖1,6二磷酸酯酶测试盒
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
果糖-1,6二磷酸酶又称果糖1,6二磷酸酯酶,催化1,6二磷酸果糖和水生成6磷酸果糖和无机磷,在糖的异生代谢和光合作用同化物蔗糖的合成中起关键性的作用。
测定原理
FBP催化1,6二磷酸果糖和水生成6磷酸果糖和无机磷,在反应体系中添加的磷酸葡萄糖异构酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH,340nm下测定NADPH增加速率,即可计算FBP活性。
需自备的仪器和用品
分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液一:液体100mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入20mL试剂四充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;
试剂二:液体7.2μL×1支,4℃保存;临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;
试剂三:粉剂×1支,-20℃保存;临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;
试剂四:液体25mL×1瓶,4℃保存;
样本的前处理
①总FBP酶提取:建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液一,冰浴匀浆后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,8000g离心10min,取上清测定。
②胞浆和叶绿体FBP酶的分离:按照植物组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液一),冰浴匀浆后于4℃,200g离心5min,弃沉淀,取上清在4℃,8000g离心10min,取上清用于测定胞浆FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震荡溶解后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,8000g离心10min,取上清测定叶绿体中FBP酶活性。
建议测定总FBP酶活性,按照步骤①提取粗酶液,若需要分别测定胞浆和叶绿体中的FBP,则按照步骤②提取粗酶液。
测定步骤
分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
将试剂一、二、三37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10分钟。
加样表:
试剂名称(μL) | 测定管 |
样本 | 20 |
试剂二 | 10 |
试剂三 | 10 |
试剂一 | 160 |
将上述试剂按顺序加入微量石英比色皿或96孔板中,立即混匀,加入最后一个试剂的同时开始计时,在340 nm波长下记录反应1min后吸光度A1和反应6min后的吸光度A2,计算ΔA=A2-A1。
FBP活性计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1)按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
FBP(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反总:反应体系总体积,2×10-4L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
(1)按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
FBP(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=643×ΔA÷W
V反总:反应体系总体积,2×10-4L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
金山禾斗石斗平台
国内试剂耗材经销代理。
国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。
提供加急物流处理,进口货物,最快交期1-2周。
进出口货物代理服务。
公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重点合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。
质量保证,所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式"服务模式,为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源,加强网络建设,提高公司内部运作效率,为客户提供方便、快捷的服务。
公司突出创新思维,提高工作效能,减低运作成本,为客户提供优惠的价格。
果糖1,6二磷酸酯酶测试盒
©
bio-rad伯乐一级代理 |伯乐Aminex |伯乐电泳槽1658001| 伯乐ddPCR bio-rad授权代理商、biorad伯乐qpcr仪是专业的授权总代理区域代理经销平台。
© 如需询价,请加客服QQ:1749072012 、客服微信:jinshanbio,或发送邮件到1749072012@qq.com
© 平台为生命科学研究相关领域提供一站式耗材试剂仪器解决方案和采购服务,数据资源基于CC协议。
© 本文地址:
https://gibcohyclone.cn/thread-21332.htm