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土壤酸性转化酶(SAI)测试盒
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
S-AI在pH 为4.5~5.0(酸性)条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。
测定原理:
S-AI催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范围内510nm光吸收增加速率与AI活性成正比。
自备用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体50mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入25mL试剂一充分溶解备用;用不完的试剂4℃保存;
试剂三:液体10mL×1瓶,4℃保存;
样品处理:
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。
测定步骤和加样表:
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
风干土样(g) | 0.05 | 0.05 |
试剂一 | | 400 |
试剂二 | 400 | |
混匀,37℃准确水浴30min后,95℃水浴10min(盖紧,以防水分散失),流水冷却后
充分混匀(以保证浓度不变),10000g 25℃离心10min,取上清液
混匀,95℃水浴10min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀,510nm处,记录各管吸光值A,如果吸光值大于2,可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数),ΔA=A测定-A对照。
S-AI活性计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0016x -0.001;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。
单位的定义:每天每g土样中产生1mg还原糖定义为一个S-AI活力单位。
S-AI活力(mg/d/g土样)=[(ΔA+0.001) ÷0.0016×V反总÷W÷T ÷1000=240×(ΔA+0.001)
V反总:反应体系总体积:0.4mL;T:反应时间,1/48d;W:样本质量,0.05g;1mg=1000μg。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0008x -0.001;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。
单位的定义:每天每g土样中产生1mg还原糖定义为一个S-AI活力单位。
S-AI活力(mg/d/g土样)=[(ΔA+0.001) ÷0.0008×V反总÷W÷T ÷1000=480×(ΔA+0.001)
V反总:反应体系总体积:0.4mL;T:反应时间,1/48d;W:样本质量,0.05g;1mg=1000μg。
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