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土壤硝态氮测试盒
微量法100T/96S
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
硝态氮是指硝酸盐中所含有的氮元素,土壤中的有机物分解生成铵盐,被氧化后变为硝态氮。土壤中硝态氮是高等植物吸收氮的主要形式之一,其含量直接关系到作物的产量与品质。测定原理
在浓酸条件下,NO3-与水杨酸反应,生成硝基水杨酸,硝基水杨酸在碱性条件下(PH>12)呈黄色,在一定范围内,其颜色深浅与含量成正比,可比色测定计算得硝态氮含量。
自备实验用品及仪器
蒸馏水、天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、振荡仪。
试剂组成和配制
试剂一:粉剂×2支,4℃避光保存。临用前根据用量每支加1mL浓硫酸充分溶解。
试剂二:液体50mL×1瓶,4℃保存。
样本处理
按照土壤质量(g):蒸馏水体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g新鲜土样,加入1mL蒸馏水)加入蒸馏水,置于振荡仪中振荡提取1h,25℃,10000g离心10min,取上清待测。
测定操作表
分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至410nm,蒸馏水调零。
操作表(于EP管中加入下列试剂)
| 空白管 | 测定管 |
样本(μL) | | 10 |
蒸馏水(μL) | 10 | |
试剂一(μL) | 20 | 20 |
充分混匀,25℃静置30min |
试剂二(μL) | 475 | 475 |
混匀,涡旋振荡,使出现的沉淀充分溶解,转移200uL至微量石英比色皿/96孔板中测定410nm处吸光值A,△A=A测定管-A空白管 |
计算公式
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y=0.0156x+0.0073,R2=0.9997
NO3——N含量(mg/kg鲜重)=(△A-0.0073)÷0.0156÷(W÷V样总)
=64.1×(△A-0.0073)÷W
V样总:加入提取液体积,1mL,W:样本质量,g
用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y=0.0078x+0.0073,R2=0.9997
NO3——N(mg/kg鲜重)=(△A-0.0073)÷0.0078÷(W÷V样总)
=128.2×(△A-0.0073)÷W
V样总:加入提取液体积,1mL,W:样本质量,g
注意事项
硝酸根不为土壤胶体吸附,且易溶于水,很容易在土壤内部移动,所以测定此指标时应注意采样深度一致。
土壤经风干或者烘干很容易引起NO3——N的变化,所以最好采用新鲜土壤进行测定,以准确反映该指标含量。
试剂一配制好后尽快使用,4℃可保存一周。
试剂一和试剂二均具有强腐蚀性,操作时需做好防护措施。
*低检出限为100μg/kg。
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