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土壤淀粉酶测试盒
微量法100T/48S
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
淀粉酶(EC3.2.1.1)是催化淀粉水解的一类酶的总称。土壤中的淀粉酶主要来自于微生物,是一种重要的酶制剂,广泛应用于粮食加工、食品、酿造、发酵、纺织品工业和医药行业。
测定原理
淀粉酶水解淀粉产生还原糖,可与3,5-二硝基水杨酸反应生成红棕色物质,在508nm处有特征吸收峰,颜色深浅在一定范围内与还原糖量成正比。
需自备的仪器和用品
天平、水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、甲苯。
试剂的组成和配制
试剂一:液体10mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体4mL×1瓶,4℃保存。若出现沉淀析出,需70℃加热溶解后再用。
试剂三:液体12mL×1瓶,4℃保存。
测定操作表
| 对照管 | 测定管 |
土样(g) | 0.02 | 0.02 |
甲苯(μL) | 10 | 10 |
25℃静置15min |
试剂一(μL) | 110 | 50 |
试剂二(μL) | | 60 |
充分混匀,37℃震荡1h,8000rpm,25℃,离心10min |
上清液(μL) | 100 | 100 |
试剂三(μL) | 100 | 100 |
充分混匀,90℃水浴5min,待冷却后,于微量石英比色皿/96孔板中测定508nm吸光值,分别记为A对照管和A测定管,△A=A测定管-A对照管。 |
计算公式
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.2525x - 0.034,R² = 0.9917
酶活单位定义:每g土样每天催化生成1mg还原糖为一个酶活力单位。
S-AL(mg/d /g鲜重)=(△A +0.034)÷ 0.2525×V反总÷W÷T
= 10.464×(△A +0.034)÷W
V反总:反应体系总体积,0.11mL;T:反应时间,1/24d;W:样本质量,g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.1263x - 0.034,R² = 0.9917
酶活单位定义:每g土样每天催化生成1mg还原糖为一个酶活力单位。
S-AL(mg/d/g)=(△A +0.034)÷ 0.1263×V反总÷W÷T
=20.928×(△A +0.034)÷W
V反总:反应体系总体积,0.11mL;T:反应时间,1/24d; W:样本质量,g。
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