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土壤全铁测试盒
微量法100T/96S
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
铁元素是一种十分重要的植物营养元素,土壤中铁含量直接影响着植物吸收利用以及生长代谢。
测定原理
在pH2-9范围内,盐酸羟胺将三价铁转化为二价铁,与邻菲罗琳反应生成橙红色配合物,在510nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。
试剂组成和配制
提取剂:粉剂×1瓶,4℃保存。
提取液:液体100mL×4瓶,4℃保存。
试剂一:液体2mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体6mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体4mL×1瓶,4℃避光保存。
样本处理
新鲜土样风干,过100目筛,按照土壤质量(g):提取剂质量(g)为1:4的比例(建议称取约0.1g土样,加入0.4g提取剂)缓慢加入提取剂于坩埚中,边加边搅拌均匀,然后在马弗炉中550℃熔融10min,然后在920℃熔融30min,趁热取出坩埚,将熔融物转入烧杯,边搅拌边加4mL提取液,必要时加盖,从烧杯口加入,防止溶液溅出,溶解30min后,5000g ,25℃离心10min,取上清液待测。
测定操作表
| 空白管 | 测定管 |
样本(μL) | | 20 |
试剂一(μL) | 20 | 20 |
试剂二(μL) | 60 | 60 |
试剂三(μL) | 40 | 40 |
H2O(μL) | 80 | 60 |
充分混匀,25℃静置20min |
于微量石英比色皿/96孔板,蒸馏水调零,测定510nm处吸光值A,分别记为A空白管和A测定管,△A=A测定管-A空白管 |
计算公式
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.1569x -0.0173,R2= 0.9992
全铁含量(mg/kg)=(△A+0.0173)÷0.1569×V反总÷(W×V样÷V样总)
= 254.94×(△A+0.0173)÷W
V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应体系中加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,4mL,W:样本质量,g
用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.0785x -0.0173,R2= 0.9992
全铁含量(mg/kg)=(△A+0.0173)÷0.0785×V反总÷(W×V样÷V样总)
= 509.55×(△A+0.0173)÷W
V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应体系中加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,4mL,W:样本质量,g
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