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原果胶含量测试盒
微量法100T/48S
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
果胶是植物细胞壁主要组成成分之一,分为水溶性果胶和不溶性果胶,即原果胶。因其具有良好的乳化、增稠和凝胶作用,在食品、纺织、印染、烟草、冶金等领域具有较广泛的应用。
测定原理
原果胶在稀酸中水解为可溶性果胶,并进一步转化为半乳糖醛酸,产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物,在530 nm处有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品
天平、研钵、常温离心机、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、浓硫酸和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液一:液体100mL×2瓶,4℃保存。
提取液二:液体100mL×1瓶,4℃保存。
标准品:液体1mL×1支,4℃保存。
试剂一:浓硫酸,自备。
试剂二:液体2mL×1支,4℃保存。
试剂三:液体3mL×1瓶,4℃避光保存。
样品处理
将组织样品捣碎,按照样品质量(g)和提取液一体积(mL)为1: 20的比列(建议取约0.05g样品,加入1mL提取液一),置于90℃恒温水浴锅中浸提30min,取出冷却后于5000g、 25℃离心10min,去掉上清,沉淀中再加入1mL提取液一重复操作一次,离心后去上清,沉淀中加入1mL提取液二,置于90℃恒温水浴锅中水解1h,取出冷却后于8000g、25℃离心15min,取上清液待测。
测定操作表
| 空白管 | 标准管 | 对照管 | 测定管 |
样本(μL) | | | 30 | 30 |
标准品(μL) | | 30 | | |
浓硫酸(μL) | 180 | 180 | 180 | 180 |
混匀、90℃水浴10min,取出后冷却 |
试剂二(μL) | | | 30 | |
试剂三(μL) | 30 | 30 | | 30 |
混匀,25℃静置30min |
蒸馏水(μL) | 90 | 60 | 60 | 60 |
充分混匀,取200μL置于微量石英比色皿/96孔板中,测定530nm处吸光值,分别记为A1、A2、A3和A4。△A1=A2-A1,△A2=A4-A3 |
注意:空白管和标准管只需测定一次。
计算公式
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
原果胶含量(mg/g鲜重)= (C标准×V标)×△A2÷△A1÷(W÷V样总) =0.25×△A2÷△A1÷W
C标准:标准品浓度,0.25mg/mL;V标:反应体系中加入标准品体积,0.02mL; V样总:加入提取液体积,1mL;W:样本鲜重,g。
用96孔板测定的计算公式如下
原果胶含量(mg/g鲜重)= (C标准×V标)×△A2÷△A1÷(W÷V样总) =0.25×△A2÷△A1÷W
C标准:标准品浓度,0.25mg/mL;V标:反应体系中加入标准品体积,0.02mL; V样总:加入提取液体积,1mL;W:样本鲜重,g。
注意事项
浓硫酸具有强腐蚀性,操作时需特别注意,90℃加热取出后冷却再打开盖子,以防液体飞溅烧伤。 若吸光值超过1,可将样本提取液进行适当稀释再进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。
*低检出限为10μg/g。
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