半纤维素(hemicellulose)含量试剂盒-试剂盒

2024-07-24

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半纤维素(hemicellulose)含量试剂盒

微量法 100管/96样

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

半纤维素是植物细胞壁中与纤维素紧密结合的多糖混合物,是构成细胞初生壁的主要成分,广泛存在于植物中,是一种新型可利用能源。

测定原理

半纤维素经酸处理后转化成还原糖,与DNS生成红棕色物质,在540nm有特征吸收峰,吸光值大反映了半纤维素含量。

需自备的仪器和用品、

天平、40目筛,恒温水浴锅、烘箱、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板

试剂组成和配制

试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体20mL×1瓶,4℃保存。

试剂四:液体5mL×1瓶,4℃避光保存。

样品处理

样品80℃烘干至恒重,粉碎,过40目筛。

测定操作表

空白管

测定管

样本(g)

0.02

试剂一(μL)

1000

90℃水浴10min,25℃,8000g离心10min,弃上清

蒸馏水(μL)

1000

充分混匀,25℃,8000g离心10min,此步骤重复3次,取沉淀105℃,烘干至恒重

试剂二(μL)

200

200

90℃水浴1h,自然冷却

试剂三(μL)

200

200

混匀,25℃,8000g离心10min

上清(μL)

60

60

试剂四(μL)

45

45

蒸馏水(μL)

195

195

充分混匀,90℃水浴5min,自然冷却,25℃,8000g离心10min

取200μL上清液于微量石英比色皿/96孔板,测定540nm处吸光值A。分别记为A空白管和A测定管,ΔA=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。

计算公式

  1. 用微量石英比色皿计算公式如下:

1、标准条件下测定的回归方程为y = 0.3968x+0.0306,R2=0.9961;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。

2、半纤维素含量(mg/g 干重)=(△A-0.0306)÷0.3968÷(W÷V样总)

= 1.01×(△A-0.0306)÷W

b.用96孔板计算公式如下:

1、标准条件下测定的回归方程为y = 0.1984x+0.0306,R2=0.9961;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。

2、半纤维素含量(mg/g 干重)=(△A-0.0306)÷0.1984÷(W÷V样总)

= 2.02×(△A-0.0306)÷W

W:样品质量,g;V样总:加入提取液体,0.4mL。

检测限为1mg/g。

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