金山科研平台授权一级代理，现货促销，欢迎询价
亚硝酸还原酶(NiR)测试盒
微量法100T/48S
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
硝酸还原酶（NiR）是一类能催化亚硝酸盐还原的酶，广泛存在于微生物及植物体内，是自然界氮循环过程中的关键酶，可以将亚硝酸盐降解为NO或NH3，从而减少环境中亚硝态氮的积累，降低因亚硝酸盐累积而造成的对生物体的毒害作用。
测定原理
亚硝酸还原酶可将NO2—还原为NO，使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2—减少，即540nm处吸光值的变化可反映亚硝酸还原酶的活性。
需自备的仪器和用品
天平、研钵、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、水浴锅、低温离心机。
试剂的组成和配制
提取液：液体112mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体4mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加5mL蒸馏水溶解。
试剂三：液体5mL×1瓶，4℃保存。（如出现沉淀可以70-80℃加热溶解）
试剂四：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。（如出现沉淀可以70-80℃加热溶解）
试剂五：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
工作液：临用前根据用量将试剂四和试剂五以1:1的比例混合。
酶液提取
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2．细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。
测定操作表
| 空白管 | 对照管 | 测定管 |
样本（μL） | | 20 | 20 |
蒸馏水（μL） | 20 | 40 | |
试剂一（μL） | 40 | | 40 |
试剂二（μL） | 40 | 40 | 40 |
混匀后，25℃反应1h |
试剂三（μL） | 40 | 40 | 40 |
充分震荡30S |
上清液（μL） | 70 | 70 | 70 |
工作液（μL） | 140 | 140 | 140 |
充分混匀，，静置3min后测定各管540nm处吸光值，分别记为A空白管、A对照管、A测定管。空白管只要做一管，每个测定管需设一个对照管。 |
计算公式
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 1.3594x + 0.0072，R2 = 0.9997；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值（A标准管-A空白管）。
1．按照蛋白含量计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每小时还原1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR（μmol/h/mgprot）=[A空白管-(A测定管-A对照管)-0.0072]÷1.3594×V标÷（V样×Cpr）÷T = 1.47×（A空白管-A测定管+A对照管-0.0072）÷Cpr
2. 按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每小时还原1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR（μmol/h/g 鲜重）=[A空白管-(A测定管-A对照管)-0.0072]÷1.3594×V标÷（W ×V样÷V样总）÷T = 1.47×（A空白管-A测定管+A对照管-0.0072）÷W
3. 按照细胞数量计算
酶活单位定义：每104个细胞每小时还原1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR（μmol/h/104 cell）=[A空白管-(A测定管-A对照管)-0.0072]÷1.3594×V标÷（细胞数量×V样÷V样总）÷T = 1.47×（A空白管-A测定管+A对照管-0.0072）÷细胞数量
V标：标准液体积，0.04mL；V样：体系中加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1h；Cpr：样本蛋白含量；W：样本质量，g
b. 使用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.6797x + 0.0072，R2 = 0.9997；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值（A标准管-A空白管）。
1．按照蛋白含量计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每小时还原1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR（μmol/h/mgprot）=[A空白管-(A测定管-A对照管)-0.0072]÷0.6797×V标÷（V样×Cpr）÷T = 2.94×（A空白管-A测定管+A对照管-0.0072）÷Cpr
2. 按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每小时还原1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR（μmol/h/g 鲜重）=[A空白管-(A测定管-A对照管)-0.0072]÷0.6797×V标÷（W ×V样÷V样总）÷T = 2.94×（A空白管-A测定管+A对照管-0.0072）÷W
3. 按照细胞数量计算
酶活单位定义：每104个细胞每小时还原1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。
NiR（μmol/h/104 cell）=[A空白管-(A测定管-A对照管)-0.0072]÷0.6797×V标÷（细胞数量×V样÷V样总）÷T = 2.94×（A空白管-A测定管+A对照管-0.0072）÷细胞数量
V标：标准液体积，0.04mL；V样：体系中加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1h；Cpr：样本蛋白含量；W：样本质量，g
注意事项
配制好的工作液3天内使用完。
若吸光值超过1.5，将上清液进行适当的稀释后再加入工作液显色，并在计算公式中乘以稀释倍数。
严格控制显色时间，否则会对结果有影响。
标准曲线线性范围为0.03μmol/mL-1.5μmol/mL。
A空白管-（A测定管-A对照管）线性范围为0.02-1.5。
金山禾斗石斗平台
国内试剂耗材经销代理。
国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。
提供加急物流处理，进口货物，最快交期1-2周。
进出口货物代理服务。
公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重点合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。
质量保证，所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式"服务模式，为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源，加强网络建设，提高公司内部运作效率，为客户提供方便、快捷的服务。
公司突出创新思维，提高工作效能，减低运作成本，为客户提供优惠的价格。
亚硝酸还原酶(NiR)测试盒
©
bio-rad伯乐一级代理 |伯乐Aminex |伯乐电泳槽1658001| 伯乐ddPCR bio-rad授权代理商、biorad伯乐qpcr仪是专业的授权总代理区域代理经销平台。
© 如需询价，请加客服QQ：1749072012 、客服微信：jinshanbio，或发送邮件到1749072012@qq.com
© 平台为生命科学研究相关领域提供一站式耗材试剂仪器解决方案和采购服务，数据资源基于CC协议。
© 本文地址：
https://gibcohyclone.cn/thread-21498.htm
QQ:1749072012