丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒-试剂盒

2024-07-24

金山科研平台授权一级代理,现货促销,欢迎询价

丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

PDC主要存在于酵母中,是乙醇发酵的关键酶之一,催化丙酮酸脱羧生成乙醛。

测定原理:

PDC催化丙酮酸脱羧生成乙醛,添加乙醇脱氢酶(ADH)来进一步催化 NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+;NADH在340 nm有吸收峰,而NAD+没有;通过测定340 nm光吸收下降速率,来计算PDC活性。

自备仪器和用品:

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体18mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体2.5mL×1瓶,4℃保存。

试剂四:粉剂×1支,﹣20℃保存。

试剂五:液体30μL×1瓶,﹣20℃保存。

混合试剂:临用前配制,将试剂四和试剂五转移至试剂三中充分溶解待用,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂六:液体2mL×1管,4℃保存。

粗酶液提取:

1、细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率200W,工作3s,间歇10s,工作35次),16000g 4℃离心20min,取上清,置冰上待测。

2、组织处理:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,16000g 4℃离心20min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样品:直接检测。

PDC测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二置于25℃水浴中预热30min。

3.空白管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL蒸馏水、20μL混合试剂、140μL试剂二和20μL试剂六,迅速混匀后于340nm比色,记录15s和75s的吸光值,分别记为A1和A2。

4.测定管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、20μL混合试剂、140μL试剂二和20μL试剂六,迅速混匀后于340nm比色,记录15s和75s的吸光值,分别记为A3和A4。

注意:空白管只需测定一次。

PDC活性计算:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃中,每毫克蛋白每分钟催化1nmol NADH 氧化为1个酶活单位。

PDC (nmol/min/mg prot) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V总×109}÷(Cpr×V样) ÷T

=1608×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:25℃中,每克组织每分钟催化1nmol NADH 氧化为1个酶活单位。

PDC (nmol/min/g 鲜重) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V总×109}÷(W×V样÷V样总) ÷T

=1608×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷W

(3)按细胞数量计算

活性单位定义:25℃中,每104个细胞每分钟催化1nmol NADH 氧化为1个酶活单位。

PDC (nmol/min/104cell) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V总×109}÷(细胞数量×V样÷V样总) ÷T

=1608×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷细胞数量

(4)按血清(浆)体积计算

活性单位定义:25℃中,每毫升血清(浆)每分钟催化1nmol NADH 氧化为1个酶活单位。PDC (nmol/min/mL) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V总×109}÷V样÷T

=1608×[(A3-A4)-(A1-A2)]

ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V总:反应体系总体积,0.2mL=2×10-4L,V样:加入反应体系中上清液体积,0.02mL;V样总:提取液体积,1 mL;Cpr:蛋白浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量试剂盒;W:样品质量;T:反应时间,1 min。

b.使用96孔板测定的计算公式如下

(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃中,每毫克蛋白每分钟催化1nmol NADH 氧化为1个酶活单位。

PDC (nmol/min/mg prot) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V总×109}÷(Cpr×V样) ÷T

=3215×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:25℃中,每克组织每分钟催化1nmol NADH 氧化为1个酶活单位。

PDC (nmol/min/g 鲜重) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V总×109}÷(W×V样÷V样总) ÷T

=3215×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷W

(3)按细胞数量计算

活性单位定义:25℃中,每104个细胞每分钟催化1nmol NADH 氧化为1个酶活单位。

PDC (nmol/min/104cell) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V总×109}÷(细胞数量×V样÷V样总) ÷T

=3215×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷细胞数量

(4)按血清(浆)体积计算

活性单位定义:25℃中,每毫升血清(浆)每分钟催化1nmol NADH 氧化为1个酶活单位。PDC (nmol/min/mL) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V总×109}÷V样÷T

=3215×[(A3-A4)-(A1-A2)]

ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:96孔板光径,0.5 cm;V总:反应体系总体积,0.2mL=2×10-4L,V样:加入反应体系中上清液体积,0.02mL;V样总:提取液体积,1 mL;Cpr:蛋白浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量试剂盒;W:样品质量;T:反应时间,1 min。

金山禾斗石斗平台

  1. 国内试剂耗材经销代理。

  2. 国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。

  3. 提供加急物流处理,进口货物,最快交期1-2周。

  4. 进出口货物代理服务。

  5. 公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重点合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

  6. 质量保证,所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式"服务模式,为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源,加强网络建设,提高公司内部运作效率,为客户提供方便、快捷的服务。

  7. 公司突出创新思维,提高工作效能,减低运作成本,为客户提供优惠的价格。

丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒

© bio-rad伯乐一级代理 |伯乐Aminex |伯乐电泳槽1658001| 伯乐ddPCR bio-rad授权代理商、biorad伯乐qpcr仪是专业的授权总代理区域代理经销平台。
© 如需询价,请加客服QQ:1749072012 、客服微信:jinshanbio,或发送邮件到1749072012@qq.com
© 平台为生命科学研究相关领域提供一站式耗材试剂仪器解决方案和采购服务,数据资源基于CC协议。
© 本文地址:https://gibcohyclone.cn/thread-21515.htm
产品询价需求提交
返回
扫码添加客服微信,咨询产品报价