γ谷氨酰转肽酶(γGT)测定(比色法)测试盒-试剂盒

2024-07-24

金山科研平台授权一级代理,现货促销,欢迎询价

γ谷氨酰转肽酶(γGT)测定(比色法)测试盒

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

γ-GT是γ-谷氨酰循环中的关键酶,催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨酰基转移到受体。也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解,产生谷氨酸盐,在细胞外谷胱甘肽新陈代谢中起了重要的作用。

测定原理:

γ-GT催化谷氨酰对硝基苯胺中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰甘氨酸,生成对硝基苯胺,在405nm有特征光吸收;通过测定405nm光吸收增加速率,来计算γ-GT酶活性。

自备仪器和用品:

低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水

试剂组成和配制:

试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体4mL×1瓶,4℃保存。

试剂四:液体14.8mL×1瓶,4℃保存。

工作液(在试剂二瓶中配制):临用前配制,把试剂三倒入试剂二瓶中,充分溶解(室温过低时可以40℃水浴促进溶解);然后把试剂四倒入试剂二瓶中,混匀后室温保存。

粗酶液提取:

  1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心15min,取上清,置冰上待测。

  2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心15min,取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体:直接测定。

γ-GT测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到405 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二置于25℃(一般物种)或者37℃(哺乳动物)水浴中预热30min(保证无沉淀)。

3. 测定管:取微量玻璃比色皿或96孔板,依次加入20μL上清液,180μL工作液,混匀后于405nm测定10s和70s时吸光度,记为A1和A2。

γ-GT活性计算:

标准曲线:y=0.006x+0.0016,x为对硝基苯胺浓度,y为吸光值,R2=0.999。

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1). 按蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为1个酶活单位。

γ-GT(μmol/min/mg prot)=[ (A2-A1)-0.0016]÷0.006×V反总÷(Cpr×V样)÷T

=1.67 × [ (A2-A1)-0.0016] ÷ Cpr

(2). 按样本质量计算

活性单位定义:25℃或者37℃中,每克样本每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为1个酶活单位。

γ-GT(μmol/min/g 鲜重)=[ (A2-A1)-0.0016]÷0.006×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T

=1.67 × [ (A2-A1)-0.0016] ÷W

(3)按细胞数量计算

活性单位定义:25℃或者37℃中,每104个细胞每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为1个酶活单位。

γ-GT(μmol/min/104 cell)=[ (A2-A1)-0.0016]÷0.006×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T

=1.67 × [ (A2-A1)-0.0016] ÷细胞数量

(4)按液体体积计算

活性单位定义:25℃或者37℃中,每毫升液体每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为1个酶活单位。

γ-GT(μmol/min/mL)= [ (A2-A1)-0.0016]÷0.006×V反总÷V样÷T

= 1.67 × [ (A2-A1)-0.0016]

V反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4L;Cpr:蛋白浓度(mg/mL);W :样品质量;V样:反应体系中加入上清液体积(mL),20μL=0.02 mL;V样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间(min),1min。

b.使用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y=0.003x+0.0016,x为对硝基苯胺浓度,y为吸光值,R2=0.999。

(1). 按蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为1个酶活单位。

γ-GT(μmol/min/mg prot)=[ (A2-A1)-0.0016]÷0.003×V反总÷(Cpr×V样)÷T

=3.34× [ (A2-A1)-0.0016] ÷ Cpr

(2). 按样本质量计算

活性单位定义:25℃或者37℃中,每克样本每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为1个酶活单位。

γ-GT(μmol/min/g 鲜重)=[ (A2-A1)-0.0016]÷0.003×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T

=3.34 × [ (A2-A1)-0.0016] ÷W

(3)按细胞数量计算

活性单位定义:25℃或者37℃中,每104个细胞每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为1个酶活单位。

γ-GT(μmol/min/104 cell)=[ (A2-A1)-0.0016]÷0.003×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T

=3.34 × [ (A2-A1)-0.0016] ÷细胞数量

(4)按液体体积计算

活性单位定义:25℃或者37℃中,每毫升液体每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为1个酶活单位。

γ-GT(μmol/min/mL)= [ (A2-A1)-0.0016]÷0.003×V反总÷V样÷T

= 3.34 × [ (A2-A1)-0.0016]

V反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4L;Cpr:蛋白浓度(mg/mL);W :样品质量,g;V样:反应体系中加入上清液体积(mL),20μL=0.02 mL;V样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间(min),1min。

注意事项:

培养细胞中γ-GT活性测定时,细胞数目须在300万-500万之间,细胞中γ-GT的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理,不能用细胞裂解液处理细胞(防止因为蛋白质变性导致酶失活)。

配置好的工作液2周内使用完毕。

金山禾斗石斗平台

  1. 国内试剂耗材经销代理。

  2. 国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。

  3. 提供加急物流处理,进口货物,最快交期1-2周。

  4. 进出口货物代理服务。

  5. 公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重点合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

  6. 质量保证,所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式"服务模式,为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源,加强网络建设,提高公司内部运作效率,为客户提供方便、快捷的服务。

  7. 公司突出创新思维,提高工作效能,减低运作成本,为客户提供优惠的价格。

γ谷氨酰转肽酶(γGT)测定(比色法)测试盒

© bio-rad伯乐一级代理 |伯乐Aminex |伯乐电泳槽1658001| 伯乐ddPCR bio-rad授权代理商、biorad伯乐qpcr仪是专业的授权总代理区域代理经销平台。
© 如需询价,请加客服QQ:1749072012 、客服微信:jinshanbio,或发送邮件到1749072012@qq.com
© 平台为生命科学研究相关领域提供一站式耗材试剂仪器解决方案和采购服务,数据资源基于CC协议。
© 本文地址:https://gibcohyclone.cn/thread-21532.htm
产品询价需求提交
返回
扫码添加客服微信,咨询产品报价