IQ431-ImmuQuest抗体:C4d补体片段单克隆抗体-抗原抗体

2024-07-24

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ImmuQuest抗体:C4d补体片段单克隆抗体

主要描述:C4d 补体 [LP69]
目标抗原:C4d 补体
目录号:智商431
数量:0.1毫克
专注:1毫克/毫升
克隆:LP69
主持人:老鼠
同种型:免疫球蛋白G1
免疫原:从正常人血浆中补充 C4d
物种反应性:人类
纯化:蛋白G亲和层析
格式:含有 PBS + 10mM 纯化抗体
应用:IHC-P、IHC-Fr
稀释:最佳抗体稀释度应通过滴定确定,但 IHC-P 的指导原则是使用 1:25-1:50
也称为:DADB-112B14.11、C4B1、C4B12、C4B2、C4B3、C4B5、C4F、CH、CO4、CPAMD3、FLJ60561、MGC164979
已发布 ID:34231390、27146825、23443736
Entrez 基因 ID:100293534、100507685、720、721
SwissProt ID:p0c0l4, p0c0l5
Omim ID(s)::120810, 120820

协议免疫荧光实验方案 - 甲醛固定
  1. 从 Tcunit 收集细胞,并使用吸力从培养皿中取出培养基。

  2. 用 1x PBS 清洗并去除。

  3. 将细胞在预温 (37°C) 多聚甲醛中在定轨摇床上室温孵育 12 分钟。

  4. 除去PFA并在1x PBS中的0.5% Triton X-100中在室温下孵育5分钟。

  5. 准备封闭试剂,这也是抗体稀释液。

  6. 在室温下用 1x PBS 洗涤细胞 2x,在轨道摇床上洗涤 4 分钟/洗涤。

  7. 用 1% NCS 和 1x PBS 在室温下封闭 30 分钟。

  8. 准备一抗(50μl/盖玻片)和湿染色室。

  9. 在室温下用 lx PBS 清洗细胞 2x,并短暂风干。

  10. 在染色室中、黑暗中、室温下与一抗一起孵育 1 小时。在此期间准备二抗。

  11. 用 1x PBS 清洗细胞 5 次(更换烧杯 5 次/每个烧杯计数 5 次)

  12. 在染色室中、黑暗中、室温下与二抗一起孵育 1 小时。

  13. 用 1x PBS 清洗细胞 5x。

  14. 坐于大皮。

溶液(染色当天新鲜配制)。

  • * 1x 磷酸盐缓冲盐水。

  • * 封闭试剂:1% NCS,溶于 1x PBS(使用新鲜的 10x PBS)。

  • * 固定液:3.5% 多聚甲醛。

1.75g PFA 溶于 20 ml d.H2O 加 5 滴 1M NaOH 中。在 50-60°C 的热板上搅拌直至溶解。添加 4 滴 HCl 并检查 pH 指示条。 PH值应为7.4。用 d.H2O 补足体积至 25ml,并添加 25ml 2xPBS。添加到盖玻片之前检查 pH 值。

免疫荧光实验方案 - 甲醇/丙酮固定
  1. 从 TCunit 收集细胞,并使用吸力从培养皿中取出培养基。

  2. 用 1x PBS 清洗并去除。

  3. 用冷甲醇:丙酮 1:1 在冰上固定细胞 10 分钟。

  4. 准备封闭剂,这也是抗体的稀释剂。

  5. 除去固定剂并在室温下用1x PBS洗涤细胞3x,在定轨摇床上洗涤4分钟/洗涤。

  6. 在 RT 下用 1% NCS 和 1x PBS 封闭 30 分钟。

  7. 准备一抗(50μl/盖玻片)和湿染色室。

  8. 在 RT 下用 1 x PBS 清洗细胞 2x,并风干约 7 分钟。

  9. 在染色室中在黑暗中与一抗一起在室温下孵育 1 小时。在此期间准备二抗。

  10. 用 1x PBS 清洗细胞 5 次(更换烧杯 5 次/每个烧杯计数 5 次)

  11. 在染色室中在黑暗中与二抗一起在室温下孵育 1 小时。

  12. 用 1x PBS 清洗细胞 5x。

  13. 坐于大皮。

溶液(染色当天新鲜配制)

  • * 1x 磷酸盐缓冲盐水。

  • * 封闭试剂:1% NCS 溶于 1x PBS(使用新鲜的 10x PBS)。

  • * 固定液:甲醇:丙酮 1:1 冰冷。

蛋白质印迹实验方案
  1. 将凝胶转移到 PDVF 或硝酸纤维素膜上

  2. 将膜放入塑料托盘中,并在封闭缓冲液中搅拌一小时

  3. 在洗涤缓冲液中冲洗

  4. 在洗涤缓冲液加一抗中孵育一小时

  5. 用洗涤缓冲液洗涤 6 X 5 分钟

  6. 在加二抗的洗涤缓冲液中孵育一小时

  7. 用洗涤缓冲液洗涤 6X 5 分钟

  8. 检测(例如 ECL、Amersham 根据制造商说明)

洗涤缓冲液

PBS + 0.1% 吐温 20

封闭缓冲液

洗涤缓冲液+5%奶粉

所用抗体的浓度取决于每种抗体、抗原的量和所用的检测方法。一般来说,稀释度在几百倍到几千倍稀释范围内,但通常必须凭经验确定。

ImmuQuest公司提供一系列*和新颖的抗体,以尽可能高的质量制造,处于科学研究的前沿。 我们所做的每一件事都是根据研究人员的需要来开发的。只要有可能,我们的抗体就会在WB、ELISA、IHC(冰冻切片和石蜡切片)和ICC/IF等应用程序中进行测试,并在我们的数据表中公布。许多都可以以定制的格式提供。Immuquest的大多数抗体都是在我们自己的严格控制下制造的。这意味着你将永远知道你点的东西是高质量的。

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ImmuQuest抗体:C4d补体片段单克隆抗体

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