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cisbio 磷酸组蛋白 H3 (Ser10) 细胞试剂盒

cisbio 磷酸组蛋白 H3 (Ser10) 细胞试剂盒

概述：磷酸化组蛋白 H3 (Ser10) 检测能够检测组蛋白 H3 尾部的 Ser10 磷酸化，组蛋白 H3 是基因表达和有丝分裂的关键调节因子。Ser10 的磷酸化与有丝分裂和减数分裂期间的染色体浓缩密切相关。

磷酸组蛋白 H3 (Ser10) 检测原理

磷酸化组蛋白 H3 (Ser10) 检测可测量在 Ser10 位点磷酸化的组蛋白 H3。与 Western Blot 不同，该检测基于平板，不需要凝胶、电泳或转移。磷酸组蛋白 H3 (Ser10) 检测使用 2 种标记抗体：一种带有供体荧光团，另一种带有受体。选择第一种抗体是因为它能特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种是因为它能够独立于蛋白质的磷酸化状态识别蛋白质。蛋白质磷酸化能够形成涉及标记抗体的免疫复合物，并使供体荧光团靠近受体，从而产生 FRET 信号。

磷酸组蛋白 H3 (Ser10) 2 板检测方案

2 板协议涉及在裂解前在 96 孔板中培养细胞，然后将裂解物转移到 384 孔低体积检测板，然后添加磷酸组蛋白 H3 (Ser10) HTRF 检测试剂。该协议使细胞的生存能力和汇合度得到监测。

磷酸组蛋白 H3 (Ser10) 1 板测定方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化组蛋白 H3 (Ser10) 可以在用于培养、刺激和裂解的单个板中进行。无需洗涤步骤。这种 HTS 设计的协议可实现小型化，同时保持稳健的 HTRF 质量。

HTRF 磷酸组蛋白 H3 (Ser10) 检测与蛋白质印迹法的比较

将指数生长的 Hela 细胞培养至 80% 汇合度，并用诺考达唑处理 16 小时。培养基去除和裂解后，通过离心收集可溶性上清液。等量的裂解物用于 WB 和 HTRF 的并排比较。HTRF 检测的灵敏度是 Western Blot 的 25 倍。使用 HTRF 磷酸组蛋白 H3 (Ser10)，仅 256 个细胞就足以进行最小信号检测，而 Western Blot 信号则需要 6,400 个细胞。HTRF 检测的灵敏度是 Western Blot 的 25 倍。

磷酸组蛋白 H3 (Ser10) 作为细胞增殖的有丝分裂生物标志物

将 Hela 和 A431 细胞接种在 96 孔板中，并用 Nocodazole 处理 16 小时，Nocodazole 是一种抗有丝分裂剂，可解聚微管并在组蛋白 H3 Ser10 磷酸化达到最大时阻断细胞有丝分裂。去除细胞培养基后，加入 50 µl、100 µl 或 200 µl 裂解缓冲液孵育 30 分钟。将 16 µl 的每种裂解物转移到 384sv 白板上进行 HTRF 分析。将裂解体积增加至 200µl 可改善 HTRF 检测信号的线性度。

磷酸组蛋白 H3 (Ser10) 作为极光激酶 B 抑制的读数

细胞周期中的磷酸组蛋白 H3-Ser10

总体组蛋白磷酸化在细胞周期期间波动非常显着，其特征在于有丝分裂中丝氨酸 10 上组蛋白 H3 磷酸化的峰值。极光激酶 B 直接负责有丝分裂组蛋白 H3 Ser10 磷酸化。与 BORA 复合的 Aurora 激酶 A 负责在 G2 期初始激活 PLK1，导致在 G2/M 转换检查点激活细胞周期蛋白依赖性激酶 1 有丝分裂进入。极光激酶 A 在人类癌症中经常被扩增，极光激酶 A 在人类肿瘤中的过度表达与不良预后和基因组不稳定相关。此外，极光激酶 B 的高表达水平与胶质母细胞瘤、卵巢癌和肝细胞癌的不良预后相关。