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Thermo Pierce磁性RNA-蛋白Pull-Down试剂盒20164磁性 RNA-蛋白沉降试剂盒的特点:•直接 – 使用末端标记 RNA 直接捕获核糖核蛋白复合物;沉降时不使用或不需要抗体•易于使用– 富集 RBP 时不需要使用离心杯或离心;简化了程序,完成 RNA 标记反应后仅需极少的手动操作时间(小于 3 小时)•灵活– 使用体外转录 RNA 或合成 RNA 进行各种长度和复
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Thermo Pierce磁性RNA-蛋白Pull-Down试剂盒20164
Thermo Scientific Pierce 磁性 RNA-蛋白沉降试剂盒为研究人员提供了一种简化、稳健的方法,使用末端标记 RNA 作为诱饵来富集蛋白-RNA 相互作用。磁性 RNA-蛋白沉降试剂盒的特点:•直接– 使用末端标记 RNA 直接捕获核糖核蛋白复合物;沉降时不使用或不需要抗体•易于使用– 富集 RBP 时不需要使用离心杯或离心;简化了程序,完成 RNA 标记反应后仅需极少的手动操作时间(小于 3 小时)•灵活– 使用体外转录 RNA 或合成 RNA 进行各种长度和复杂性的标记;使用内源性、过表达和体外翻译裂解物成功富集的蛋白•特异性– 磁珠背景噪音低;无关 RNA 或突变 RNA 不会显著影响特定 RBP 的富集•经济– 价低于单独购买商业合成的末端标记 RNA、磁珠和试剂•全套– 含有标记模块和富集模块,模块中带有检测所需的缓冲液;包括阳性对照 RNA、阴性对照 RNA 以及 RBP 抗体磁性 RNA-蛋白沉降试剂盒提供了使用以脱硫生物su末端标记的 RNA 高效富集 RNA 结合蛋白 (RBP) 的试剂以及链霉su亲和素磁珠。全套试剂盒中包含的试剂足够进行 20 次 RNA 标记反应和 20 次蛋白-RNA 沉降分析。这种直接富集蛋白-RNA 相互作用的方法可以替代蛋白-RNA 复合体或核酸嵌入蛋白的抗体捕获法。本试剂盒的另一个优点是,它为标记反应和沉降分析均提供了经验证的质控品。该试剂盒适于进行多种下游应用,包括 Western 印迹和质谱 (MS)。包括:全套试剂盒中包含 Pierce RNA 3'-端脱硫生物su化试剂盒、阳性和阴性 RNA 对照品、核酸兼容性链霉su亲和素磁珠以及 RBP 富集和洗脱缓冲液需要:用户提供的 RNA 和裂解物(实验样品)应用:• 突变分析• 结构功能分析• RNA 与蛋白相互作用的鉴别• 未知 RNA:蛋白结合对或复合物的 MS 分析使用标记 RNA 作为诱饵来富集 RNA-结合蛋白优于抗体富集,因为其直接捕获相互作用。本试剂盒中包括Pierce RNA 3'-末端脱硫生物su化试剂盒,其使用 T4 RNA 连接酶将单个胞苷二磷酸核苷酸连接至单链 RNA 的 3'-末端。脱硫生物su既可用作检测靶标,也可用作可洗脱亲和柄。核苷酸与脱硫生物su之间的间隔臂长度已经过优化处理,可高效连接至微珠上,而不会阻碍 RNA 与蛋白的结合。RNA 结合蛋白富集的程序已经过优化,易于使用。先将标记好的 RNA 捕获到微珠上,以作好结合蛋白的准备。将结合了 RNA 的微珠放入蛋白 RNA 结合缓冲液中进行平衡,然后加入蛋白裂解物。洗涤之后,使用非变性生物su洗脱缓冲液或 SDS-PAGE 上样缓冲液洗脱样品。洗脱后的样品即可进行各种下游操作,包括 Western 印迹或质谱分析。沉降检测的控制系统包括雄激素受体 (AR) RNA 的 3'-非翻译区、poly(A)25 RNA 以及哺乳动物细胞裂解物。雄激素受体 RNA 的近端 3'-非翻译区 (UTR) 中包含多个富含 UC 的区域,可结合 HuR 以及 Poly(C) 结合蛋白质(CP1 和 CP2)。这些 RNA 结合蛋白可调节 mRNA 的稳定性 (HuR) 以及 mRNA 的代谢和翻译(CP1 和 CP2)。阴性对照 RNA 和 poly(A)25 RNA 中并不包含 HuR 或 poly(C) BP 的结合位点。
Thermo Pierce磁性RNA-蛋白Pull-Down试剂盒20164
规格容量(公制)50 pmol RNA/反应产品线Pierce™数量1 个试剂盒类型RNA-蛋白沉降试剂盒足够用于20 次反应产品规格试剂盒内容与储存足够用于:20 次 RNA-蛋白复合物沉降反应• Pierce 核酸兼容链霉su亲和素磁珠,1 mL(在 4°C 下储存)• RNA 捕获缓冲液 (1X),10 mL(在 4°C 下储存)• Tris(20 mM,pH 值 7.5),5 mL(在 4°C 下储存)• 蛋白-RNA 结合缓冲液 (10X),1 mL(在 4°C 下储存)• 洗涤缓冲液 (1X),10 mL(在 4°C 下储存)• 生物su洗脱缓冲液,1.5 mL(在 4°C 下储存)• HuR 单克隆抗体(小鼠),50 µL(在 4°C 下储存)• 阳性 RNA 对照品 (AR RNA),250 pmol(在-20°C 下储存)• 阴性 RNA 对照品 (polyA25RNA),250 pmol(在-20°C 下储存)• Pierce RNA 3' 末端脱硫生物su化试剂盒(产品编号 20163;在-20°C 下储存)
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