一、重要的洗涤

　　不充分的洗涤会导致差异和高背景，从而带来不理想的实验结果。如果未结合的材料残留在微孔板中，那么它会增加背景噪音。有必要的话，可增加洗涤液中的盐浓度，这会阻止非特异结合反应。如果背景过高，怀疑洗涤不够时，可以尝试增加洗涤次数。

　　二、QIAGEN试剂盒检测试剂要适量

　　切勿使用过多的QIAGEN试剂盒。如果浓度过高，或者未正确稀释，则会导致高背景。也不要显色过度，如有必要，优化一下何时应加入终止液。

　　三、抗体浓度须优化

　　如果试剂稍有不同，则可能需要优化抗体的量。非特异的抗体结合会增加背景。为了防止这一点，切勿使用过多的一抗或二抗。

　　四、关键的封闭

　　封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的机会。如果背景过高，怀疑封闭不充分，那么可以尝试使用更高浓度的封闭液，或适当延长封闭时间。

　　目前主要有两种类型的封闭液：蛋白和非离子型去污剂。使用的类型须取决于多个因素，包括微孔板的表面试剂、吸附的抗原、抗体和检测试剂。好的封闭液应降低非特异性结合，但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。

　　保证以上四个步骤不出错，可以让QIAGEN试剂盒发挥的作用。