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土壤过氧化氢酶(SCAT)测试盒
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
S-CAT是土壤微生物代谢的重要酶类,在H2O2清除系统中具有重要作用。
测定原理:
H2O2在240nm下有特征吸收峰,通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化,即可反应S-CAT活性的高低。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)和蒸馏水
试剂组成和配制:
试剂一:液体300μL×1瓶,4℃保存;临用前加入29.7mL蒸馏水充分溶解后待用;用不完的试剂4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存(如出现结晶析出,60℃-90℃水浴溶解后使用);
试剂三:液体3mL×1瓶,4℃保存。
样品处理:
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。
测定步骤:
分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至240nm,蒸馏水调零。
测定前务必准备96孔UV板一块(UV板不是普通酶标板,普通酶标板只能透过可见光,不能透过紫外光,检测波长小于340nm务必使用UV板)。
加样表
试剂名称 | 测定管 | 无基质管 | 无土管 |
风干土样(g) | 0.03 | 0.03 | |
试剂一(μL) | 260 | | 260 |
蒸馏水(μL) | | 260 | |
25℃振荡培养20min
混匀8000g,25℃离心5min,取180uL上清
混匀,240nm处记录各管吸光值A。注意:每个测定管要设一个无基质管,无土管只要做一管。S-CAT活性计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
单位的定义:每天每g风干土样催化1μmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
计算公式:S-CAT(μmol/d/g)=[(A无土管-A测定管+A无基质管)×V反总÷(ε×d)×106]÷W÷T=16.5×(A无土管-A测定管+A无基质管)
V反总:反应体系总体积,3×10-4L;ε:过氧化氢摩尔消光系数,4.36×104L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;T:反应时间,20min=1/72d;W:样本质量,0.03g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
单位的定义:每天每g风干土样催化1μmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
计算公式:S-CAT(μmol/d/g)=[(A无土管-A测定管+A无基质管)×V反总÷(ε×d)×106]÷W÷T=33×(A无土管-A测定管+A无基质管)
V反总:反应体系总体积,3×10-4L;ε:过氧化氢摩尔消光系数,4.36×104L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;T:反应时间,20min=1/72d;W:样品质量,0.03g。
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