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土壤碱性蛋白酶(SALPT)测试盒
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化,其水解产物是高等植物的氮源之一。S-ALPT在碱性环境下催化蛋白质水解,与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。
测定原理:
碱性条件下,S-ALPT可将酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在680nm有特征吸收峰。
实验中所需仪器及设备:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板、双蒸水
试剂组成和配置:
试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入6ml蒸馏水充分溶解;用不完的试剂4℃保存;
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入2mL试剂七,沸水浴加热溶解,然后加入8ml试剂一,充分混匀备用,用不完的试剂4℃保存;
试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入30ml蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂4℃保存;
试剂五:液体8mL×1瓶,4℃保存;
试剂六:液体1.5mL×1支,0.05mg/ml标准酪氨酸溶液,4℃保存;
试剂七:液体5mL×1瓶,4℃保存;
样品处理:
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。
测定操作:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至680nm,蒸馏水调零。
2、试剂二、三和四40℃水浴10min。
3、样本测定:
试剂名称 | 测定管 | 对照管 |
风干土样(g) | 0.02 | 0.02 |
试剂一(μL) | | 150 |
试剂三(μL) | 150 | |
混匀后,40℃水浴30min,振荡5-6次,使土样与反应液充分接触
混匀,8000g 25℃离心10min,取上清液,在EP管或96孔板中加入下列试剂
| 测定管 | 对照管 | 标准管 |
上清液(μL) | 60 | 60 | |
试剂六(μL) | | | 60 |
试剂四(μL) | 280 | 280 | 280 |
试剂五(μL) | 60 | 60 | 60 |
混匀,40℃水浴20min,8000g 25℃离心10min,取上清液200μL,680nm下读取各管吸光值A
注意:标准管只需测一次。每个测定管设一个对照管。
S-ALPT活性计算:
单位定义:每天每g土样中产生1mg酪氨酸为一个S-ALPT活力单位。
S-ALPT(mg/d/g土样)=C标准×(A测定管-A对照管)÷A标准管×V反总÷W÷T=24×(A测定管-A对照管)÷A标准管
C标准管:标准管浓度,0.05mg/mL;V反总:反应体系总体积,0.2mL;T:反应时间,30min=1/48d;W:样本质量,0.02g。
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