土壤木质素过氧化物酶(SLiP)测试盒-试剂盒

2024-07-24

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土壤木质素过氧化物酶(SLiP)测试盒

微量法100T/48S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

木质素过氧化物酶(EC1.11.1.14)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,属于木质素降解酶系,在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。

测定原理

木质素过氧化物酶氧化藜芦醇生成藜芦醛,在310nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)。

试剂组成和配制

试剂一:液体25mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体15mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体10mL×1瓶,4℃保存。

样品处理

新鲜土样风干,过30-50目筛。

测定操作

对照管

测定管

土样(g)

0.04

0.04

甲苯(μL)

30

30

25℃静置15min

试剂一(μL)

200

蒸馏水(μL)

200

试剂二(μL)

120

120

试剂三(μL)

80

80

30℃震荡反应3h,冰浴5min,12000g,4℃离心10min,取上清200μL,于微量石英比色皿/96孔板(UV)板,测定310nm处吸光值,分别记为A对照和A测定,△A=A测定-A对照

酶活计算公式

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

酶活性定义:每克土壤每天氧化1nmol藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。

S-LiP活性(nmol/d /g 土样)=×V反总÷W÷T= 344×△A÷W

ε:藜芦醛摩尔消光系数:9300L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,0.4mL;W:样本质量,g;T:反应时间,3h

  1. 用96孔板测定的计算公式如下

酶活性定义:每克土壤每天氧化1nmol藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。

S-LiP活性(nmol/d /g 土样)=×V反总÷W÷T= 688×△A÷W

ε:藜芦醛摩尔消光系数:9300L/mol/cm;d:比色皿光径,0.5cm;V反总:反应总体积,0.4mL;W:样本质量,g;T:反应时间,3h

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