吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)测试盒-试剂盒

2024-07-24

金山科研平台授权一级代理,现货促销,欢迎询价

吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)测试盒

微量法 100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

脯氨酸是植物体内适应逆境胁迫的一种重要的渗透调节物质。高等植物中脯氨酸代谢因其初始底物不同,分为谷氨酸( Glu) 和鸟氨酸( Orn) 两条合成途径。吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS, Δ1-pyrroline-5-carboxylate synthetase)是以谷氨酸为前体合成脯氨酸途径的关键酶,对植物适应逆境胁迫起关键作用。

测定原理:

吡咯啉-5-羧酸合成酶催化谷氨酸生成P5C过程中分解ATP生成ADP和无机磷,通过钼酸铵比色法测定单位时间内产生无机磷的量可确定P5CS活性。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体60 mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:液体12 mL×1瓶,4℃保存;

试剂三:液体12 mL×1瓶,4℃保存;

试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存,用时加入25 mL蒸馏水,溶解后4℃保存一周;

试剂五:粉剂×1瓶,4℃保存,用时加入25 mL蒸馏水,溶解后4℃保存一周;

试剂六:液体25mL×1瓶,室温保存;

试剂七:10mmol/L标准磷贮备液10mL×1瓶,4℃保存。

0.5μmol/mL 标准磷应用液配制:将试剂七20倍稀释,即取 0.1mL试剂七加1.9mL蒸馏水充分混匀。

定磷剂的配制:按H2O: 试剂四:试剂五:试剂六=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染,定磷剂现用现配。

注意:配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。

样品酶液的制备:

1、组织样品:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

操作步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至660nm。

2、酶促反应(在EP管中加入下列试剂)

对照管

测定管

试剂二(μL)

100

样本(μL)

100

混匀,37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)准确水浴10min

试剂三(μL)

100

100

试剂二(μL)

100

样本(μL)

100

混匀,8000g,25℃离心10min,取上清液

3、定磷(在EP管或96孔板中加入下列试剂)

空白管

标准管

对照管

测定管

0.5μmol/ml标准磷应用液(μL)

20

上清液(μL)

20

20

蒸馏水(μL)

20

定磷试剂(μL)

200

200

200

200

混匀,室温放置30min,在660nm处,记录各管吸光值。

注意:

1、由于每一个样都必须做对照,本试剂盒100管保证测48份P5CS活性。

2、此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试管要求严格无磷。

3、空白管和标准管只要做一管。每个测定管设一个对照管。

计算

1、血清(浆)P5CS活力的计算:

单位定义:每小时每毫升血清(浆)中P5CS消耗ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。

P5CS活力(μmol/h/mL)=C标准管×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V总÷V样÷T=9 ×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)

2、组织中P5CS活力的计算:

(1)按蛋白浓度计算:

单位定义:每小时每毫克组织蛋白中P5CS消耗ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。

P5CS活力(μmol/h/mgprot)=C标准管×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V总÷(Cpr×V样)÷T=9 ×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位定义:每小时每克组织中P5CS消耗ATP 产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。P5CS活力(μmol/h/g鲜重)=C标准管×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V总÷(W× V样÷V样总)÷T=9 ×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W

C标准管:标准管浓度,0.5μmol/mL;V总:酶促反应总体积,0.3mL;V样:加入样本体积,0.1mL ;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,1/6小时;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。

金山禾斗石斗平台

  1. 国内试剂耗材经销代理。

  2. 国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。

  3. 提供加急物流处理,进口货物,最快交期1-2周。

  4. 进出口货物代理服务。

  5. 公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重点合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

  6. 质量保证,所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式"服务模式,为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源,加强网络建设,提高公司内部运作效率,为客户提供方便、快捷的服务。

  7. 公司突出创新思维,提高工作效能,减低运作成本,为客户提供优惠的价格。

吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)测试盒

© bio-rad伯乐一级代理 |伯乐Aminex |伯乐电泳槽1658001| 伯乐ddPCR bio-rad授权代理商、biorad伯乐qpcr仪是专业的授权总代理区域代理经销平台。
© 如需询价,请加客服QQ:1749072012 、客服微信:jinshanbio,或发送邮件到1749072012@qq.com
© 平台为生命科学研究相关领域提供一站式耗材试剂仪器解决方案和采购服务,数据资源基于CC协议。
© 本文地址:https://gibcohyclone.cn/thread-21436.htm
产品询价需求提交
返回
扫码添加客服微信,咨询产品报价