H2S含量测定试剂盒-酶类

2024-07-24

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H2S含量测定试剂盒

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

H2S是一种新型气态信号分子,存在于脑内的神经递质,生理浓度的H2S对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用,并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。

测定原理:

H2S与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝,亚甲基蓝在665nm处有最大吸收峰,通过测定其吸光值可计算H2S含量。

自备实验用品及仪器:

天平、低温离心机、酶标仪、96孔板、蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体25mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体16mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体8mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂四:液体8mL×1瓶,4℃保存。

试剂五:液体1.5mL×1管,4℃避光保存。

样品处理:

  1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

  2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

  3. 血清(浆):直接测定。

操作表:

  1. 酶标仪预热30min,调节波长至665nm。

  2. 操作表

空白管

测定管

样品(μL)

150

H2O(μL)

150

试剂一(μL)

150

150

充分震荡混匀

试剂二(μL)

150

150

10000g,4℃,离心10min,去上清,留沉淀

H2O(μL)

150

150

10000g,4℃,离心10min,去上清,留沉淀

试剂一(μL)

75

75

试剂三(μL)

75

75

充分震荡混匀

试剂四(μL)

75

75

10000rpm,4℃,离心10min,吸取200μL上清于96孔板中

试剂五(μL)

10

10

混匀,25℃静置5min,测定665nm吸光值,记为A测定和A空白,ΔA=A测定-A空白。

H2S含量计算公式:

用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线回归方程为:y = 0.0022x,R2 = 0.9988

(1)组织样品

a.按照蛋白浓度计算

H2S(nmol/mg prot)=×V反总÷(V样×Cpr)=681.8×ΔA÷Cpr

b.按照样本重量计算

H2S(nmol/g 鲜重)=×V反总÷(V样÷V样总×W)= 681.8×ΔA÷W

(3) 细胞

H2S(nmol/104 cell)=×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量(万个))=681.8×ΔA÷细胞数量(万个)

(2)液体样品H2S(nmol/mL)=×V反总÷V样= 681.8×ΔA

V反总:反应总体积,0.225mL;V样:反应中样品体积,0.15mL;V样总:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL

注意事项

*低检出限为1nmol/mL。

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H2S含量测定试剂盒

  • 中文名称:甲泛葡胺

  • 英文名称:Metrizamide

分子式:C18H22I3N3O8

分子量:789.1

  • CAS号:31112-62-6

    级别:Reagent Grade

  • EINECS编号:250-475-5

  • 储存条件:2~8℃

  • 中文别名:甲泛葡胺、阿米派克、甲泛影酰胺、室椎影

  • 英文别名:2-((3-(acetylamino)-5-(acetylmethylamino)-2,4,6-triiodobenzoyl)amino)-2-deox、2-(3-ace***ido-2,4,6-triiodo-5-(n-methylace***ido)benzamido)-2-deoxy-d-gluco

  • 是否危险:否

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甲泛葡胺/甲泛影酰胺/室椎影/阿米派克/造影胺/Metrizamide

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