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sydlabs：蛋白酶K溶液（肽酶 K、内切蛋白酶 K、内肽酶 K、蛋白酶 K、内肽酶 K、Tritirachium 碱性蛋白酶、Tritirachium 蛋白丝氨酸蛋白酶）

蛋白酶 K 溶液通常用于蛋白质消化、DNA 提取、RNA 纯化、直接 PCR 和基因分型。由于它能非常有效地灭活 DNase 和 RNase，因此在核酸制备过程中添加重组蛋白酶 K，以分离高度天然、未受损的 DNA 或 RNA；它用于直接 PCR 试剂盒，通过破坏细胞裂解物（组织或细胞培养细胞）中的蛋白质来进行基因分型，并释放基因组 DNA。

蛋白酶 K 是一种广谱丝氨酸蛋白酶，最初从真菌 Engyodontium album 中分离出来。该蛋白酶因其消化角蛋白的能力而被命名为“蛋白酶 K"。晶体和分子结构研究表明，该酶属于枯草杆菌蛋白酶家族，其活性位点具有催化三联体 (Asp39-His69-Ser224)。蛋白酶 K 酶没有明显的切割特异性，优先切割位点是邻近疏水性氨基酸的肽键。

在还原剂（例如 5 mM DTT）存在下，蛋白酶 K 表现出更高的蛋白水解活性。蛋白酶 K 被丝氨酸蛋白酶抑制剂（例如 PMSF、DFP 和 AEBSF）抑制。

蛋白酶 K 在 1% Triton X-100 中具有活性，在 0.5% (w/v) SDS 中全具有活性，可使蛋白质底物变性以提高消化率。该酶在 50-200 ug/mL、pH 7.5-8.0、37 °C 时效果佳，并且通常会因后续苯酚提取而变性。孵育时间从 30 分钟到 18 小时不等，蛋白酶 K 可以在长时间孵育期间自动消化。

重组蛋白酶 K 是天然蛋白酶的突变体，具有更高的比活性和产量以及更宽的 pH 和温度范围。大规模重组酶生产具有批次一致性、纯度高和成本效益高等优势。重组蛋白酶 K 的无 DNA 性质使其非常适合分离 PCR 和 RT-PCR 模板。

重组蛋白酶K来自酵母细胞，克隆了编码Engyodontium album（Tritirachium album）内溶蛋白酶的基因。CAS 号：39450-01-6。EC：3.4.21.64。分子量：29.3 kDa。等电点：8.9。pH范围：4.5-12.0；在pH 7.5-11.5范围内具有高活性。单位定义： 1 个单位的蛋白酶 K 定义为在 37°C、pH 7.5 下每分钟从酪蛋白产生 1 umol 酪氨酸的酶活性。比活性：≥ 780 单位/ml 蛋白质。温度曲线：建议温度范围 37-70°C； 70°C 时具有最大活性。消光系数：E^1%= 14.2； 280 nm，10 mM NaCl 和 5 mM CaCl2，pH 8.0。纯度：对每批 PCR 级重组蛋白酶 K 溶液进行测试，确保不含 RNase、DNase 和 DNA。在 40 µg 蛋白酶 K 与 2 ug RNA 在 37°C 下孵育 2 小时的质量控制程序中未检测到 RNase。在 40 µg 蛋白酶 K 与 1 ug λ DNA 在 37°C 下孵育 6 小时的质量控制程序中未检测到 DNase。该制剂被认为不含 RNase 和 DNase。配方：0.2 μM 过滤溶液。浓度：20毫克/毫升。溶液配制：PCR 级蛋白酶 K 溶液 (20 mg/ml) 使用 0.22 µm 过滤器进行灭菌，并提供在 50% 灭菌甘油中，以等分试样在 24°C 至 -80°C 的宽温度范围内储存。推荐的蛋白酶 K 稀释缓冲液：20 mM Tris-HCl (pH 7.4)、1 mM CaCl2；或 20 mM Tris-HCl (pH 7.4)、1 mM CaCl2 和 2% 甘油。活化剂：1-5 mM Ca²⁺。为了刺激蛋白酶 K 活性，可以添加1-5 mM Ca²⁺。使用激活剂进行优化可以显着提高蛋白酶活性。添加EDTA除去钙后，酶活性会降低25%。如果 EDTA-Ca²⁺酶活性会降低 80%通过凝胶过滤从酶溶液中除去复合物，同时可以通过添加过量的Ca²⁺来部分恢复复合物。抑制剂：DIFP 或 PMSF。蛋白酶 K 被 DIFP 或 PMSF 灭活（PMSF 最终浓度为 5 mM）。然而，它不受 EDTA、碘乙酸、胰蛋白酶特异性抑制剂 TLCK、胰凝乳蛋白酶特异性抑制剂 TPCK 和对氯汞苯甲酸盐的抑制。

运输：PCR 级重组蛋白酶 K 溶液 (20 mg/ml) 用冰袋运输。收到后，立即将其存放在下面建议的温度下。稳定性和储存：使用手动除霜冰箱并避免重复冻融循环。自收到之日起超过 2 年，在 –20°C 下保存。自收到之日起>1 年，在 2–8°C 下保存。

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