金山科研平台授权一级代理，现货促销，欢迎询价

Cmctag Alapca 纳米抗体试剂

GFP-Catch-Mag™ 抗 GFP 羊驼纳米抗体偶联磁珠 目录号：AT1773

规格：5 mL（200 次反应）浓度：10 mg/ml

由于检测细胞内维多利亚水母绿色荧光蛋白 (GFP) 仅需要紫外线或蓝光照射，因此它为监测活细胞中的基因表达和蛋白质定位提供了好的手段。

抗 GFP 磁珠是一种羊驼单域抗体，通过酰肼键共价连接到磁珠上。该抗体在融合蛋白的 N 端、C 端和内部位置结合 GFP。

• 描述

• GFP-Catch-Mag™ 抗 GFP 标签纳米抗体（来自羊驼 VHH，单域抗体）偶联磁珠

• 反应性

• 抓取在大肠杆菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞或体外转录/翻译系统中表达的转染 GFP 融合蛋白。所有表达 GFP 融合蛋白的系统都是合适的。

测试应用免疫沉淀（IP）共免疫沉淀（Co-IP），染色质免疫沉淀（ChIP）RNA结合蛋白免疫沉淀（RIP）酶测定质谱法亲和纯化在IP中，25µL的珠悬浮液用于约500µL的粗总细胞裂解物溶液。最佳稀释度/浓度应由最终用户确定。

特性免疫原这种纳米抗体是用带有 GFP 蛋白的羊驼制成的。形成磁珠共轭抗 GFP 纳米抗体，该产品在 10 mM PBS、pH 7.4 和作为防腐剂的 0.02% (w/v) 叠氮hua钠中提供。储存说明储存于 4 °C。不要冻结

该抗体为纳米抗体，来自aplaca，其优点如下：

• 快速、可靠和高效的一步免疫沉淀

• 即用型、高稳定性、高亲和力

• 下游 WB 无重抗体链和轻抗体链干扰

• 在苛刻的洗涤条件下稳定

• 适用于下游质谱、CoIP、ChIP、RIP、蛋白质纯化等

• 适用于以下样本：哺乳动物、植物、细菌、酵母、昆虫等。

结构图

• 结合能力

• ~1mg GFP 蛋白/ml 珠悬浮液

• 珠子直径

• ~ 40 微米

• 应用

• 在下游 WB 和质谱分析中不会干扰传统抗体重链和轻链

• 一步免疫沉淀

• 高度特异性结合

• 低背景

• 高亲和力

• 稳定性高

哺乳动物细胞裂解物中 GFP 融合蛋白的免疫沉淀 (IP/CoIP) 方案

该方案旨在对 GFP 标记的融合蛋白进行免疫沉淀，以通过蛋白质免疫印迹或活性测定进行分析。

溶液和试剂1X 细胞裂解缓冲液：50 mM Tris (pH 7.5)、150 mM NaCl、1 mM EDTA、1 mM EGTA、1% Triton X-100。建议在使用前添加 1 mM PMSF。

1X 洗涤缓冲液：TBS（50 mM Tris HCl，150 mM NaCl，pH 7.5）

5X SDS 上样缓冲液

1. 准备细胞裂解物1. 要在非变性条件下收获细胞，去除培养基并用冰冷的 PBS 冲洗细胞一次。去除 PBS 并向每个板（10 cm，106-107 个细胞）中加入 0.5 mL-1mL 1X 冰冷细胞裂解缓冲液（添加蛋白酶抑制剂混合物和 PMSF），并将板在冰上孵育 30-40 分钟，4 °旋转摄氏度。2. 从平板上刮下裂解的细胞并转移到微量离心管中。继续冰上。3. 在冰上对样品进行超声处理 3 次，每次 5 秒（可选步骤）。4. 4°C、14,000 xg 微量离心 10 分钟，将上清液转移到新管中。如有必要，可将裂解物储存在 –80°C 下。

注意：如果目的蛋白是核蛋白，请使用RIPA裂解液裂解细胞，并加入PIC、1mM PMSF、2.5mM Mgcl2和1mg/ml DNase I。

2. 平衡珠子1. 颠倒产品管或轻轻上下吹打以重悬珠子。不要涡旋珠子。2. 吸取 25 µL 珠浆到 EP 管（1.5 mL）中，然后加入 1 mL 冰冷的洗涤缓冲液。用手轻轻摇晃 1-2 分钟。不要涡旋珠子。3、磁选60秒。4. 弃去上清，重复洗涤 3 次。

3. 免疫沉淀1. 取 500 μL 细胞裂解液，加入 25 μL 抗体偶联磁珠悬液，4°C 孵育 1-3 小时或 4°C 过夜。

4. 清洗蛋白质-纳米抗体-珠复合体注意：如果研究了 Co-IP 相互作用的蛋白质，请减少洗涤次数，并降低洗涤缓冲液的离子强度。

加入 1.0 mL 的 Wash Buffer 并悬浮珠子复合物，磁选，然后弃去上清液。重复上述步骤至少四次。

5. 下游分析的洗脱GFP 融合蛋白的洗脱-根据蛋白质特性或进一步用途推荐两种洗脱方法：

选项 A：天然洗脱在酸性条件下用 0.2 M 甘氨酸 (pH 2.5) 洗脱。这是一种快速有效的洗脱方法。用中和缓冲液（1 M Tris，pH 10.4）中和洗脱的蛋白质可能有助于保持其活性。中和缓冲液需要预先放入收集管中。

注意：需提前做初步实验，确定中和甘氨酸（PH 2.5）需要多少中和缓冲液

选项 B：SDS-PAGE 的变性洗脱在凝胶电泳和免疫印迹的变性条件下用样品上样缓冲液洗脱。

A：用 0.2 M 甘氨酸 (pH 2.5) 洗脱 - 该过程应在室温下进行。注意：不要将珠子留在该缓冲液中超过 20 分钟。

1. 向每个样品和对照珠复合物中加入 50 µL 0.2 M 甘氨酸 (pH 2.5)。2. 在 4°C 下轻轻摇动或在旋转器上孵育样品和对照 5-10 分钟。3. 将试管放入磁力分离器中以收集珠子。将上清液转移到含有 25-35 μL 中和缓冲液的新管中。小心不要转移任何珠子。4. 重复步骤 1-3 以提高洗脱效率，将洗脱液集中在同一管中或通过不同管收集洗脱液。6. 如需立即使用，请将洗脱液储存在 2-8 °C。储存在 –20 °C 以进行长期储存。

B：用 SDS-PAGE 上样缓冲液洗脱1. 用 30 µL 1X SDS 样品上样缓冲液重悬每个样品（6 µL 5X SDS 样品上样缓冲液可以添加到 24 µL 细胞裂解缓冲液中）。涡流。2. 在 95 – 100°C 下将样品管和对照管煮沸 10 分钟。3. 将试管放入磁力分离器中以收集珠子。将上清液转移到新管中。样品和对照已准备好加载到 SDS-PAGE 上，并使用抗 GFP 或针对融合蛋白的特异性抗体进行免疫印迹。

金山禾斗石斗平台 是一家专注于分子生物学、细胞生物学、细菌学、遗传学、免疫学、生物化学、蛋白质学、细胞治疗、临床应用等领域，以销售为主的生物技术公司。销售的产品涉及，细胞株和菌株、胎牛血清、生化试剂、ELISA试剂盒、抗体和抗原、细胞因子、技术服务、实验耗材和消耗品、仪器设备等。

Engibody Biotechnology，Inc被Engibody Biotechnology，Inc.收购。Engibody 是用于信号转导途径的试剂产品的。我们为免疫学，肿瘤学，细胞生物学，干细胞生物学和细胞凋亡提供抗体，抑制剂和试剂的全面创新的产品组合。Engibody 通常首先将关键试剂推向市场， 然后 开发了800多种用于抗体和抑制剂的产品。

除抗体外， Engibody 还提供用于细胞因子，生长因子和原代细胞的多种试剂。我们为生物系统分析提供完整的解决方案。

Engibody 已成长为所有实验室试剂（包括抑制剂，抗体和细胞因子）的可靠供应商。 Engibody 近建造了一个全新的先进设施，以适应其不断增长的产品线。

Cmctag销售GFP-Catch-Mag™ 抗 GFP 羊驼纳米抗体偶联磁珠Cmctag Alapca 纳米抗体试剂