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stemcell 05580 NaiveCult,NaïveCult™ Induction Kit/NaïveCult™ 诱导试剂盒

2024-10-23

NaïveCult™ Induction Kit/NaïveCult™ 诱导试剂盒

货号：05580

规格：1 kit

价格：14718

产品类型：多能干细胞培养

品牌：STEMCELL Technologies

NaïveCult™诱导培养基成分确定，用于无基因化学诱导人多能干细胞(hPSC)和ES 还原为初始态（Naive-like）。该试剂盒是基于英国剑桥大学剑桥干细胞研究所的许可下开发（2017）。并能对其进行维持培养。RSeT是该培养基不含bFGF和TGF-β细胞因子。含有预先筛选优化的组份，以保证批次间的一致性。该培养基与mTeSR™1 (货号#85850) 或者 TeSR™-E8™ (货号 #05990)培养的人胚胎干(ES)细胞和人诱导的多能干(iPS)细胞兼容。使用NaïveCult™诱导培养基形成的hPSC或ES具有明显的初始样（naïve-like）特征，比如细胞克隆非常紧密，克隆边缘有光折射呈半球状。表达Naive-like hPSCs相关的重要转录因子(Guo et al. 2016; Guo et al. 2017; Takashima et al.).。ReST培养的Naive多能干当在TeSR1中培养可以返回到primed态，也可以在STEMdiff™内胚层试剂盒(货号#05110)、STEMdiff™ SMADi 神经诱导分化试剂盒 (货号#08581), and STEMdiff™ 中胚层诱导试剂 (货号#05220)中进行分化。NaïveCult™ 诱导培养基需要额外添加 histone deacetylase inhibitor (HDACi) (丁酸钠[货号，#72242] 或丙戊酸[货号 #72292])。

优点：

- 非转基因手段诱导人Naive态ES和iPS；- 强烈诱导多个ES和iPS细胞系；- 形成的hPSC高表达Naive相关基因；- 成分确定，包含预筛选的组分。

数据：

图1. 将始发态的hPSCs还原成类原态流程图

primed hPSC接种在mTeSR™1或TeSR™-E8™中，基质胶为Corning Matrigel，滋养层细胞为失活的MEF，并添加终浓度为10 uM的 Y-27632，低氧条件下培养24小时。第1天，培养基改为添加组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI)的诱导培养基1，细胞培养3天，每天换液。第4天，培养基改为诱导培养基2，细胞培养至第11天，每天换液。在第11天，hPSC单细胞被传代至新鲜的iMEF上，然后每3-4天传代一次，直到第2段在诱导培养基中结束。从第3段开始，hPSC在诱导培养基中培养。背景分化将在第3段和第8段之间减少，此时细胞可以转移到Naivecult™扩增培养基中，以便长期维持和扩增。

图2. ES和iPS返回初始态（A）传7代的ES细胞（B）9代的iPS细胞系（WLS-1C）在NaïveCult™诱导培养基诱导并在NaïveCult™ 扩增培养基中扩增。在转变阶段，克隆形态从扁平形态转变到高度致密、穹顶态。

图3.在NaiveCult诱导培养基中的hPSC™高表达Naive-PSCs相关的标记在NaiveCult诱导培养基中培养的(A) H9 ES cells and (B) WLS-1C iPS细胞系高表达Naive-PSCs相关的标记(DNMT3L, KLF17, KLF2, KLF4, NANOG, TBX3, and TCFP2L1)。

图 4.在NaiveCult™扩增培养基中培养的Naive在返回primed后具有三胚层分化潜能在NaiveCult™扩增培养基中培养的Naive人iPS细胞在mTeSR™1中返回primed后并分化为所有三个体细胞系。（A）人WLS-1C iPS细胞系在 STEMdiff™ 定性内胚层诱导培养基 (货号 #05110) 分化后表达 >90% CXCR4+/SOX17+ 定性内胚层祖细胞的代表流式散点图。（B）人WLS-1C iPS细胞系在 STEMdiff™ 中胚层诱导培养基 (货号 #05220) 分化后表达>80% Brachyury+/OCT4-中胚层祖细胞的代表流式散点图。（C）用STEMdiff™Smadi神经诱导培养基（#08581）诱导人WLS-1C细胞分化，染色PAX6（绿色）和SOX1（红色）双阳性的代表性免疫荧光图像。

组成成分：

▪NaïveCult™诱导基础培养基, 76 mL▪NaïveCult™ 20X 诱导添加物 A, 4 mL▪NaïveCult™ 1000X诱导添加物B, 80 µL▪NaïveCult™ 扩增基础培养基, 2 x 400 mL▪NaïveCult™ 5X 诱导添加物C, 200 mL▪NaïveCult™ 1000X 诱导添加物D, 500 µL▪NaïveCult™ 1000X 扩增添加物, 500 µL

stemcell 05580 NaiveCult,NaïveCult™ Induction Kit/NaïveCult™ 诱导试剂盒

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