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stemcell 05795,BrainPhys™ hPSC Neuron Kit/BrainPhys™ hPSC 神经元诱导培养试剂盒

2024-10-23

BrainPhys™ hPSC Neuron Kit/BrainPhys™ hPSC 神经元诱导培养试剂盒

货号：05795

规格：500 mL/Kit

价格：6984

产品类型：神经细胞培养

品牌：STEMCELL Technologies

BrainPhys™是一种成分确定且不含血清的新型神经元培养基，用于培养原代神经元以及人多能干细胞（hPSCs）衍生的神经元，包括胚胎干（ES）和诱导多能干（iPS）细胞。传统的培养（如：Neurobasal®培养基和Dulbecco’s改良Eagle培养基（DMEM））支持细胞存活，但会抑制神经细胞活性，包括：动作电位的产生和突触的活性。BrainPhys™由Dr. Fred H. Gage实验室的Dr. Cedric Bardy研发，可更好地支持神经元在体外的功能性1。在BrainPhys™中进行成熟培养的神经元经历与中枢神经系统（CNS）生理条件相似的生长环境，因此在培养物中具有突触活性的神经元的比例相对较多。此外，BrainPhys™增强了神经元在体外培养中的生理相关性，从而提高了实验发现向临床应用转化的成功率。为了确保细胞的长期存活，BrainPhys™必须添加合适的血清替代物，例如：NeuroCult™ SM1 神经元添加物（货号#05711）和/或N2-A添加物（货号#07152）。BrainPhys™神经元培养基SM1 试剂盒（货号 #05792）推荐用于原代神经元的培养。BrainPhys™ 神经元培养基 N2-A/SM1 试剂盒（货号 #05793），配合谱系生长因子和小分子后，推荐用于ES/iPS来源的神经元的分化和成熟。

优点：

-生理相关性。与大脑的胞外环境更加相似；-活性。增强神经元功能，具突触活性的神经元比例更高；-流程化。无需更换培养基即可进行功能性检测；-通用性。支持由ES/iPS细胞分化的神经元及CNS原代神经元的长期培养；-稳定性。严格的原料筛选和质量控制可确保最大化地减少批次间的差异。

数据：

图1. 在BrainPhys™中进行成熟培养的大鼠神经元十分健康并且形态成熟（A，C）将E18大鼠原代皮层神经元接种于加入了NeuroCult™ SM1神经元添加物的NeuroCult™神经元基础培养基中。培养5天后，将细胞过渡到加入了 NeuroCult™ SM1添加物的BrainPhys™中培养，每隔3 - 4天进行半换液，培养至 14天（A）或21天（C）。（B，D）将E18大鼠原代皮层神经元接种于加入了 NeuroCult™ SM1添加物的Neurobasal®培养基中培养14天（B）或21天（D）。在 BrainPhys™中成熟的神经元形态与在传统神经元培养基中成熟的神经元一致。

图2. 在BrainPhys™中进行成熟培养的原代神经元培养物中含有更多的神经元将E18大鼠原代皮层神经元接种于NeuroCult™神经元基础培养基（NCSM1）或 Neurobasal®培养基（NBSM1）中，两者都加入了NeuroCult™ SM1。培养5天后，将其中的一半培养物过渡到添加了NeuroCult™ SM1的BrainPhys™中，每隔 3 - 4天进行半换液。另一半培养物则仍以用于接种的原培养基继续维持培养。无论初始接种使用以上哪种培养基，经过21天后，在BrainPhys™中的神经元数量都多于一直培养在NeuroCult™神经元基础培养基或Neurobasal®培养基中的神经元（n = 2，平均值± SEM [每个实验分别设置三个平行孔]）。

图3. 在经典电生理学检测中，以BrainPhys™进行成熟培养的大鼠神经元显示更强的兴奋性和抑制性突触活性（A，C）将E18大鼠原代皮层神经元接种于添加了NeuroCult™ SM1的 NeuroCult™神经元基础培养基中。培养5天后，将细胞过渡到添加了 NeuroCult™ SM1的BrainPhys™中继续培养，每隔3 - 4天进行半换液，培养至 21天。（B，D）将E18大鼠原代皮层神经元接种于传统配方，即加入NeuroCult™ SM1添加物的Neurobasal®培养基，共培养21天。在BrainPhys™中成熟的神经元（A，C）显示自发兴奋性（AMPA受体介导，A）和抑制性（GABA受体介导，C）突触电流。以BrainPhys™进行成熟培养的神经元的自发突触电流在比例和幅度上始终比在传统神经元培养基中培养的神经元（B，D）更大。上图为代表图例。

图4. 在BrainPhys™中成熟的大鼠突触前标志物的表达将E18大鼠原代皮层神经元接种于加入了NeuroCult™ SM1的NeuroCult™ 神经元基础培养基中。培养5天后，将细胞过渡到加入了NeuroCult™ SM1 的BrainPhys™中，每隔3-4天进行半换液。21天后，培养物显示广泛的树突棘结构，突触前标志物Synapsin（A-B，绿色）呈离散点状沿细胞体和树突分布（MAP2，A，C，红色)，表明此时的神经元已达到形态成熟状态。比例尺：50 µm。

图5. 在BrainPhys™中分化14天后的hPSC所衍生神经元表达成熟神经元标志物首先使用STEMdiff™神经诱导培养基以基于类胚体的流程将H9细胞生成神经祖细胞（NPCs）。然后，将NPCs培养于BrainPhys™中，并加入2% NeuroCult™ SM1添加物、1% N2添加物A、20 ng/mL GDNF、20 ng/mL BDNF、1 mM db-cAMP和200 nM抗坏血酸，以启动神经元的分化。分化14天后，神经元形成较长的突起，并表达Synapsin1（A-B，绿色）和MAP2（A，C，红色）。比例尺：50 μm。

图6. 在BrainPhys™、NeuroCult™ SM1和N2添加物中生成的hPSC 衍生神经元健康且表型正常使用STEMdiff™神经诱导培养基以基于类胚体的流程将H9细胞生成NPCs。然后，将NPCs培养于（A）BrainPhys™中，并加入2% NeuroCult™ SM1添加物，1% N2A、20 ng/mL GDNF、20 ng/mL BDNF、1 mM db-cAMP和200 nM 抗坏血酸，以启动神经元的分化；或在相同的添加物条件下培养于（B）DMEM/ F12中。在两培养基中均培养44天。与在DMEM/F12中分化的培养物相比，在 BrainPhys™中由NPCs分化的神经元培养物显示广泛的神经突和变少的细胞碎片。比例尺：100 μm。

图7. 在BrainPhys™中进行成熟培养的由hPSC衍生的神经元显示更强的兴奋性和抑制性突触活性首先使用STEMdiff™神经诱导培养基以基于类胚体的流程将H9细胞生成 NPCs。然后，将NPCs接种于（A、C）BrainPhys™中培养44天，其中加入 2% NeuroCult™ SM1添加物、1% N2添加物-A、20 ng/mL GDNF、20 ng/mL BDNF、1 mM db-cAMP和200 nM抗坏血酸，以启动神经元的分化；或使用（B、D）含相同添加物的DMEM/F12将其培养44天。（A、C）在BrainPhys™中成熟的神经元显示自发兴奋性（AMPA受体介导，A）和抑制性（GABA受体介导，C）突触电流，其频率和幅度比在DMEM/F12中培养的神经元（B、D）更大。上图为代表图例。

组成成分：

▪BrainPhys™神经元基础培养基, 500 mL（货号#05790）▪NeuroCult™ SM1神经元添加物, 10 mL （货号 #05711）▪N2 -A添加物, 5 mL （货号 #07152）▪ 人重组 BDNF, 10 µg (货号 #78005)▪ 人重组GDNF, 10 µg (货号#78058)

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