金山科研平台授权一级代理,现货促销,欢迎询价
海藻糖含量测试盒
微量法100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
海藻糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。由于海藻糖具有不同于其他碳水化合物的生物学特性,能在干旱、高温、脱水、冷冻、高渗透压及毒性物质等恶劣环境下保护生物体细胞蛋白质、脂肪、糖类、核酸等组分不受损害。
测定原理:
蒽酮比色法。具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样品的测定等优点。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板﹑研钵、浓硫酸(不允许快递)和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体 100ml×1瓶,4℃保存;
试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存;
海藻糖提取:
1、细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3S,间隔10S,重复30次),室温静置45min,振荡3~5次,冷却后,8000g,25℃离心10min,取上清。
2、组织的处理:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),冰浴匀浆,室温静置45min,振荡3~5次,冷却后,8000g,25℃离心10min,取上清。
3、血清(浆)的处理:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议取0.1mL血清(浆)加入1mL提取液),冰浴匀浆,室温静置45min,振荡3~5次,冷却后,8000g,25℃离心10min,取上清。
测定步骤:
分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至620nm,蒸馏水调零。
调节水浴锅至95度。
3、工作液的配制:临用前在试剂一中加入3.75mL蒸馏水后,缓慢加入21.25mL浓硫酸,不断搅拌,充分溶解,待用;用不完的试剂4℃保存一周;
4、样本测定:取60μL样本和240μL工作液至EP管中,95度水浴10 min(盖紧,防止水分散失),自然冷却至室温,取200uL至微量石英比色皿或96孔板中,在620 nm 波长下记录测定吸光度值A。
注意:由于工作液具有强腐蚀性,请谨慎操作。
若吸光值大于1,请将样本用提取液稀释后再测定,计算公式中乘以相应的稀释倍数。
海藻糖含量计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为y = 8.8976x+0.0729;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。
2、按样本鲜重计算:
海藻糖含量(mg/g 鲜重)= [V1×(A -0.0729)÷8.8976]÷(W×V1÷V2)=0.112×(A -0.0729) ÷W。
3、按样本蛋白浓度计算:
海藻糖含量(mg/mg prot)= [V1×(A -0.0729) ÷8.8976]÷(V1×Cpr)=0.112×(A -0.0729) ÷Cpr。
4、按细菌或细胞密度计算:
海藻糖含量(μg/104 cell)=[1000×V1×(A -0.0729) ÷8.8976]÷(500×V1÷V2)=0.224×(A -0.0729)
5、血清(浆)海藻糖含量计算
海藻糖含量(mg/mL)=[V1×(A -0.0729)÷8.8976 )÷(V3×V1÷V2)=1.12×(A -0.0729)
1000:1mg/mL=1000µg/mL;V1:加入反应体系中样本体积,60μL=0.06mL;V2:加入提取液总体积1mL;;V3:加入血清(浆体积),0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为y = 4.4488x+0.0729;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。
2、按样本鲜重计算:
海藻糖含量(mg/g 鲜重)=[ V1×(A -0.0729)÷4.4488]÷(W×V1÷V2)=0.224×(A -0.0729) ÷W。
3、按样本蛋白浓度计算:
海藻糖含量(mg/mg prot)= [V1×(A -0.0729)÷4.4488]÷(V1×Cpr)=0.224×(A -0.0729) ÷Cpr。
4、按细菌或细胞密度计算:
海藻糖含量(μg/104cell)=[1000×V1×(A-0.0729)÷4.4488]÷(500×V1÷V2)=0.448×(A -0.0729)
5、血清(浆)海藻糖含量计算
海藻糖含量(mg/mL)=[V1×(A -0.0729)÷4.4488 )÷(V3×V1÷V2)=2.24×(A -0.0729)
1000:1mg/mL=1000µg/mL;V1:加入反应体系中样本体积,60μL=0.06mL;V2:加入提取液总体积1mL;;V3:加入血清(浆体积),0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
注意:*低检测限为10μg/g鲜重或0.1μg/ mg prot
金山禾斗石斗平台
国内试剂耗材经销代理。
国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。
提供加急物流处理,进口货物,最快交期1-2周。
进出口货物代理服务。
公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重点合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。
质量保证,所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式"服务模式,为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源,加强网络建设,提高公司内部运作效率,为客户提供方便、快捷的服务。
公司突出创新思维,提高工作效能,减低运作成本,为客户提供优惠的价格。
海藻糖含量测试盒
©
bio-rad伯乐一级代理 |伯乐Aminex |伯乐电泳槽1658001| 伯乐ddPCR bio-rad授权代理商、biorad伯乐qpcr仪是专业的授权总代理区域代理经销平台。
© 如需询价,请加客服QQ:1749072012 、客服微信:jinshanbio,或发送邮件到1749072012@qq.com
© 平台为生命科学研究相关领域提供一站式耗材试剂仪器解决方案和采购服务,数据资源基于CC协议。
© 本文地址:
https://gibcohyclone.cn/thread-21127.htm