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RIPA 裂解液（强） (RIPA Lysis Buffer)

RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞、组织快速裂解液。RIPA 裂解液裂解后的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 等。RIPA 裂解液的主要成分为 Tris-Hcl，NaCl，Triton X-100， sodium deoxycholate，SDS，可以有效裂解不同样本并抑制蛋白降解。

RIPA 裂解液 50mL

运输与保存方法冰袋运输，4℃保存，有效期一年。

操作说明：对于组织样品

1. 组织块用冷 PBS 洗涤，去除血污。剪成小块置于匀浆器中。

2. 加入 10 倍组织体积本试剂（使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂）冰上全匀浆。

3. 将匀浆液转移至 1.5ml 离心管中，振荡。冰浴 30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞全裂解。

4. 12000g 离心 5min，收集上清，即为总蛋白溶液。

对于培养细胞样品：

1. 对于贴壁细胞：

a.用 PBS 冲洗细胞 2-3 次。最后一次全吸干残留液。

b.加入适当体积的细胞总蛋白提取试剂（使用前数分内加入蛋白酶抑制剂）于培养板、瓶内 3-5 分钟。期间反复晃动培养板、瓶，使试剂与细胞充分接触。

c.用细胞刮刀将细胞及试剂刮下，收集到 1.5ml 离心管中。

2. 对于悬浮细胞：离心收集细胞，每 6 孔板细胞加约 250 ul 细胞总蛋白提取试剂（在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂），振荡。

3. 冰浴 30min，期间每 10 分钟用 200ul 移液器反复吹打数次，确保细胞全裂解。

4. 12000g 离心 5min，收集上清，即为总蛋白。

注意事项：

对于组织样品：每 50mg 组织约加入 1ml 的本试剂裂解。对于软骨、皮肤等组织，可适当减少试剂用量，以提高蛋白浓度。

对于培养细胞样品：

1. 正常细胞密度下，每个 6 孔板细胞加入 250ul 左右裂解液。其它类推。

2. 样本过量时裂解可能会出现较粘稠状。可用移液器反复吹打，直至呈液状为止。如果一直较稠，可再加入适量裂解液，或者使用超声破碎仪。

3. 此试剂对人体有害，请适当防护。

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