脱氢酶(DHA)测试盒-试剂盒

2024-07-24

金山科研平台授权一级代理,现货促销,欢迎询价

脱氢酶(DHA)测试盒

微量法100管/96样

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

脱氢酶(dehydrogenase,DHA)是一类催化物质氧化还原反应的酶,催化底物通过细胞色素系统被氧化,释放的能量供机体使用,是生物体取得能量的一种方式。

测定原理

在细胞呼吸过程中,氢受体2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC)在脱氢酶作用下接受氢以后,被还原为三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF),TF呈现红色,于485nm测定其吸光值,即得脱氢酶活性。

自备实验仪器及用品

筛子、天平、恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、冰、蒸馏水、甲醇(不允许快递,请用户自备)。

试剂的组成和配制

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存

试剂一:粉剂×1瓶,使用前加10mL试剂二溶解,4℃避光保存(尽量现配现用)。

试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:甲醇,自备。

样品处理

  1. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

  2. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后8000g,4℃,离心20min。

  3. 液体:直接检测。

测定步骤和操作表

空白管

测定管

样品(μL)

100

蒸馏水(μL)

100

试剂一(μL)

100

试剂二(μL)

100

充分混匀,37℃培养24h

试剂三(μL)

900

900

振荡1h,8000g,25℃,离心5min,取200μL上清于微量石英比色皿/96孔板,测定A485,△A=A测定-A空白管。空白管只要做一管。

脱氢酶活力计算

  1. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y =0.0422x - 0.0312;R2= 0.9988;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。

1.按照蛋白浓度计算

酶活单位定义:在37℃时,每mg蛋白样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

DHA(μg/ min /mg prot)=(△A+0.0312)÷0.0422×V反总÷(Cpr×V样)÷T= 0.181×(△A+0.0312)÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活单位定义:在37℃时,每克样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

DHA(μg/ min /g 鲜重)=(△A+0.0312)÷0.0422×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T= 0.181×(△A+0.0312)÷W

3. 按液体体积计算

酶活单位定义:在37℃时,每mL样本每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

DHA(μg/ min /mL)=(△A+0.0312)÷0.0422×V反总÷V样÷T= 0.181×(△A+0.0312)

V反总:反应总体积,1.1mL;V样:加入反应体系中样本体积,0.1mL;T:培养时间,1d=1440min;W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL。

b. 用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y =0.0211x - 0.0312;R2= 0.9988;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。

1.按照蛋白浓度计算

酶活单位定义:在37℃时,每mg蛋白样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

DHA(μg/ min /mg prot)=(△A+0.0312)÷0.0211×V反总÷(Cpr×V样)÷T= 0.362×(△A+0.0312)÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活单位定义:在37℃时,每克样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

DHA(μg/ min /g 鲜重)=(△A+0.0312)÷0.0211×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T= 0.362×(△A+0.0312)÷W

3. 按液体体积计算

酶活单位定义:在37℃时,每mL样本每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

DHA(μg/ min /mL)=(△A+0.0312)÷0.0211×V反总÷V样÷T= 0.362×(△A+0.0312)

V反总:反应总体积,1.1mL;V样:加入反应体系中样本体积,0.1mL;T:培养时间,1d=1440min;W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL。

注意事项:

配制好的试剂一避光保存于4℃,最好在一周内使用,若出现红色,则不能使用。

金山禾斗石斗平台

  1. 国内试剂耗材经销代理。

  2. 国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。

  3. 提供加急物流处理,进口货物,最快交期1-2周。

  4. 进出口货物代理服务。

  5. 公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重点合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

  6. 质量保证,所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式"服务模式,为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源,加强网络建设,提高公司内部运作效率,为客户提供方便、快捷的服务。

  7. 公司突出创新思维,提高工作效能,减低运作成本,为客户提供优惠的价格。

脱氢酶(DHA)测试盒

© bio-rad伯乐一级代理 |伯乐Aminex |伯乐电泳槽1658001| 伯乐ddPCR bio-rad授权代理商、biorad伯乐qpcr仪是专业的授权总代理区域代理经销平台。
© 如需询价,请加客服QQ:1749072012 、客服微信:jinshanbio,或发送邮件到1749072012@qq.com
© 平台为生命科学研究相关领域提供一站式耗材试剂仪器解决方案和采购服务,数据资源基于CC协议。
© 本文地址:https://gibcohyclone.cn/thread-21237.htm
产品询价需求提交
返回
扫码添加客服微信,咨询产品报价