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植物硝态氮测试盒
微量法100T/96S
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
硝态氮是植物最主要的氮源。植物体内硝态氮含量反映了土壤中硝态氮的供应情况,可作为土壤氮肥的指标。测定植物体内的硝态氮含量,不仅能够反映出植物的氮素营养情况,而且对鉴定蔬菜和以植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
测定原理
在浓酸条件下,NO3-与水杨酸反应,生成硝基水杨酸,硝基水杨酸在碱性条件下(PH>12)呈黄色,在一定范围内,其颜色深浅与含量成正比,可比色测定计算得硝态氮含量。
自备实验用品及仪器
蒸馏水、天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
试剂一:粉剂×2支,4℃避光保存。临用前根据用量每瓶加1.2mL浓硫酸充分溶解。
试剂二:液体60mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1支,4℃保存。
样本处理
按照质量(g):蒸馏水体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL蒸馏水)加入蒸馏水,室温匀浆后置于90℃恒温水浴锅中浸提30min,期间不断晃动或者置于90℃恒温摇床中振荡提取30min,待冷却后于25℃,12000g离心15min,取上清待测。(深色植物匀浆后加入约3mg试剂三后再提取)
测定操作表
分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至410nm,蒸馏水调零。
在EP管中如下表加样
| 空白管 | 测定管 |
样本(μL) | | 10 |
蒸馏水(μL) | 10 | |
试剂一(μL) | 20 | 20 |
充分混匀,25℃静置30min |
试剂二(μL) | 475 | 475 |
混匀,涡旋振荡,使出现的沉淀充分溶解,转移200uL至微量石英比色皿/96孔板中测定410nm处吸光值A,△A=A测定管-A空白管 |
注意:空白管只需测定一次。
计算公式
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y=0.0156x+0.0073,R2=0.9997
NO3——N含量(mg/kg鲜重)=(△A-0.0073)÷0.0156÷(W÷V样总)
=64.1×(△A-0.0073)÷W
V样总:加入提取液体积,1mL,W:样本质量,g
用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y=0.0078x+0.0073,R2=0.9997
NO3——N(mg/kg鲜重)=(△A-0.0073)÷0.0078÷(W÷V样总)
=128.2×(△A-0.0073)÷W
V样总:加入提取液体积,1mL,W:样本质量,g
注意事项
试剂一配制好后尽快使用,4℃可保存一周。
试剂一和试剂二均具有强腐蚀性,操作时需做好防护措施。
*低检出限为2μg/g。
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