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土壤芳基硫酸酯酶(SASF)测试盒
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
土壤芳基硫酸酯酶来自于土壤微生物,能酶促土壤有机硫化物转化为植物可吸收的无机态硫,在硫素的生物化学循环和植物的硫营养代谢中具有重要的作用,是反映土壤质量的一个重要生物学指标。
测定原理:
S-ASF能够催化对-硝基苯硫酸钾生成对-硝基苯酚,后者在410nm有特征光吸收。
自备用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:甲苯5mL×1瓶,4℃保存(自备);
试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×2支,-20℃保存;临用前加入1.25mL蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存;
试剂四:液体5mL×1瓶,4℃保存;
试剂五:液体20mL×1瓶,4℃保存;
样品处理:
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。
测定步骤:
试剂名称 | 测定管 | 对照管 |
风干土样(g) | 0.05 | 0.05 |
试剂一(μL) | 12.5 | 12.5 |
振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置15min
试剂二(μL) | 200 | 200 |
试剂三(μL) | 50 | |
蒸馏水(μL) | | 50 |
混匀,37℃水浴1h后
充分混匀,室温静置2min后,10000g 25℃离心10min,取200μL上清液于410nm处测定吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。S-ASF活力计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0066x -0.013;x为标准品浓度(μmol/L),y为吸光值。
单位的定义:每天每g土样中产生1 μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-ASF活力(μmol/d/g 土样)=(ΔA+0.013)÷0.0066×V反总÷W÷T=19.09×(ΔA+0.013)
T:反应时间,1h=1/24d;V反总:反应体系总体积:2.625×10-4L;W:样本质量,0.05g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0033x -0.013;x为标准品浓度(μmol/L),y为吸光值。
单位的定义:每天每g土样中产生1 μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-ASF活力(μmol/d/g 土样)=(ΔA+0.013)÷0.0033×V反总÷W÷T=38.19×(ΔA+0.013)
T:反应时间,1h=1/24d;V反总:反应体系总体积:2.625×10-4L;W:样本质量,0.05g。
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