土壤N乙酰βD葡萄糖苷酶(SNAG)测试盒-试剂盒

2024-07-24

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土壤N乙酰βD葡萄糖苷酶(SNAG)测试盒

微量法 100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

S-NAG是溶酶体中的一种酸性水解酶,由土壤微生物分泌。S-NAG活性变化与机体某些病理状态密切相关。

测定原理:

S-NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算NAG活性。

自备用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:甲苯5mL×1瓶,4℃保存;(自备)

试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入10mL蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存;

试剂三:液体20mL×1瓶,4℃保存;

试剂四:液体15mL×1瓶,4℃保存;

样品处理:

新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。

测定步骤:

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。

  2. 加样表

试剂名称

测定管

对照管

风干土样(g)

0.02

0.02

试剂一(μL)

10

10

室温振荡混匀15min

90℃振荡混匀15min

试剂二(μL)

130

蒸馏水

130

试剂三(μL)

160

160

混匀,37℃振荡反应1h后,90℃水浴5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却,

10000g 25℃离心10min,取上清液(在EP管或96孔板中加入下列试剂)

上清液(μL)

70

70

试剂四(μL)

130

130

充分混匀,室温静置2min后, 400nm处测定吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

S-NAG活力计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 0.00645x -0.0054;x为标准品浓度(μmol/L),y为吸光值。

单位的定义:每天每g土样中产生1 μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

S-NAG活力(μmol/d/g 土样)=(ΔA+0.0054)÷0.00645×V反总÷W÷T=55.81×(ΔA+0.0054)

T:反应时间,1h=1/24d;V反总:反应体系总体积:3×10-4L;W:样本质量,0.02g。

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 0.0043x -0.0054;x为标准品浓度(μmol/L),y为吸光值。

单位的定义:每天每g土样中产生1 μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

S-NAG活力(μmol/d/g 土样)=(ΔA+0.0054)÷0.0043×V反总÷W÷T=83.72×(ΔA+0.0054)

T:反应时间,1h=1/24d;V反总:反应体系总体积:3×10-4L;W:样本质量,0.02g。

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