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diagnocine MCDB 153 Medium

MCDB 153 培养基，含微量元素、L-谷氨酰胺和 28mM HEPES 缓冲液，不含碳酸氢钠粉末产品代码：HM-AT135产品描述：MCDB 培养基是为培养特定细胞类型而开发的，无需血清补充剂。每种 MCDB 培养基都针对特定的细胞类型进行配制。MCDB 105 和 110 被配制用于人类二倍体细胞的快速克隆生长正常。MCDB 131 培养基最初是为人类微血管内皮细胞 (HMVEC) 的克隆生长而开发的。MCDB 151、201 和 302 最初是为人类角质形成细胞、鸡胚成纤维细胞和 CHO 细胞的克隆生长而开发的。AT135 是含有微量元素、L-谷氨酰胺和 28mM HEPES 缓冲液的 MCDB 153。HEPES 是一种两性离子缓冲液，在 37ºC 时的 pKa 为 7.3，可防止在培养开始时倾向于发生的初始 pH 升高，并增加培养基的缓冲能力。建议用户查阅文献以获取有关针对不同细胞系特定的培养基补充和生理生长要求的建议。

方向：

1. 将 17.7gms 悬浮在 900ml 组织培养级水中，持续温和搅拌直至粉末*溶解。不要加热水。

2. 在 1 升培养基中加入 1.176 克碳酸氢钠粉末 (TC230) 或 15.7 毫升 7.5% 碳酸氢钠溶液 (TCL013)，搅拌至溶解。

3. 使用 1N HCl 或 1N NaOH 将 pH 值调整到低于所需 pH 值的 0.2 - 0.3 pH 单位，因为在过滤过程中 pH 值会升高。

4. 用组织培养级水定容至1000ml。

5. 通过孔隙率为 0.22 微米或更小的无菌膜过滤器过滤，立即对培养基进行消毒，使用正压而不是真空，以尽量减少二氧化碳的损失。

6. 根据需要在无菌条件下添加无菌补充剂，并将所需数量的无菌培养基分配到无菌容器中。

7. 将液体培养基储存在 2-8°C 和避光处直至使用。

需要但未提供的材料：

• 组织培养级水（TCL010）

• 碳酸氢钠粉（TC230）

• 碳酸氢钠溶液，7.5% (TCL013)

• 1N 盐酸 (TCL003)

• 1N 氢氧化钠 (TCL002)

• 胎牛血清 (RM1112/RM10432)

质量控制：

• 外观：灰白色至乳白色均匀粉末。

• 溶解度：14.9 gms/L 的澄清溶液。

• 不含碳酸氢钠的 pH 值：5.10 - 5.70

• 碳酸氢钠的 pH 值：6.40 - 7.00

• 不含碳酸氢钠的渗透压: 300.00 - 340.00

• 碳酸氢钠渗透压：320.00 - 360.00

• 培养反应：通过分析细胞的形态来定性评估培养基的生长促进能力，并通过估计细胞计数并通过至少三个传代培养将其与对照培养基进行比较来定量评估培养基的生长促进能力。

• 内毒素含量：NMT 5EU/ml

储存和保质期：

1. 所有粉状培养基和制备好的液体培养基应储存在 2-8°C。在有效期内使用。尽管有上述推荐的储存条件，某些粉末介质在某些情况下可能会出现一些变质/降解的迹象。这可以通过颜色变化、外观变化和颗粒物质的存在以及溶解后的混浊度来表示。

2. 不推荐制备浓缩培养基，因为游离碱氨基酸和溶解度低的盐复合物可能在浓缩培养基中沉淀。

3. 制备培养基的 pH 值和碳酸氢钠浓度是影响细胞生长的关键因素。这也受所用培养基量和培养容器体积（表面积与体积比）的影响。例如，在大瓶中，如 Roux 瓶，随着大量二氧化碳的释放，pH 值会明显升高。因此，必须为每种细胞类型确定 pH、碳酸氢钠浓度、表面积与体积比的最佳条件。我们建议严格监测 pH 值。如果需要，可以使用无菌 1N HCl 或 1N NaOH 或通过在二氧化碳中鼓泡来调节 pH 值。

4. 如果需要，可以在过滤灭菌之前或之后将补充剂添加到培养基中，并遵守无菌预防措施。培养基的保质期取决于添加到培养基中的补充剂的性质。

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