想要知道核酸电泳的两种分类是什么看看这些吧

2024-08-08

  今天跟大家分享的是关于核酸电泳的两种分类,下面就让我们一起来了解一下吧。  一、琼脂糖凝胶电泳  1.原理  琼脂糖是从海藻中提取出来的一种线状高聚物。将琼脂糖在所需缓冲液中加热熔化成清澈、透明的溶胶,然后倒入胶模中,凝固后将形成一种固体基质,其密度取决于琼脂糖的浓度。  将凝胶置电场中,在中性pH值下带电荷的核酸通过凝胶网孔向阳极迁移,迁移速率受到核酸的分子大小、构象、琼脂糖浓度、所加电压、电场、电泳缓冲液、嵌入染料的量等因素影响。  在不同条件下电泳适当时间后,大小、构象不同的核酸片段将处在凝胶不同位置上,从而达到分离的目的。琼脂糖凝胶的分离范围较广,用各种浓度的琼脂糖凝胶可分离长度为200bp至50kb的DNA。  2.琼脂糖凝胶电泳的仪器及试剂 仪器设备应包括水平凝胶电泳槽及其配套电泳梳、稳压电泳仪、微波炉或普通电炉。同时配备紫外线检测仪和照相系统。  二、聚丙烯酰胺凝胶电泳  1.原理 聚丙烯酰胺凝胶通过丙烯酰胺单体、链聚合催化剂N,N,N',N'-四甲基乙二胺(TEMED)和过硫酸铵以及交联剂N,N'-亚甲双丙烯酰胺之间的化学反应而形成。  丙烯酰胺单体在催化剂作用下产生聚合反应形成长链,长链经交联剂作用交叉连接形成凝胶,其孔径由链长和交联度决定。链长取决于丙烯酰胺的浓度,调节丙烯酰胺和交联剂的浓度比例,可改变聚合物的交联度。  聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据电泳样品的电荷、分子大小及形状的差别达到分离目的,兼具分子筛和静电效应,分辨力高于琼脂糖凝胶电泳。可分离只相差1个核苷酸的DNA片段。  聚丙烯酰胺凝胶电泳用于分析和制备长度小于1kb的DNA片段。根据所要分离的核酸片段大小,可制备不同浓度的凝胶。  2.凝胶的制备和电泳 由于氧能抑制丙烯酰胺的聚合反应,灌制聚丙烯酰胺凝胶常在两块封闭的玻璃平板所形成的夹层间进行。在这种装置形式下,仅有顶层的凝胶与空气中的氧气相接触,从而大大减少了氧对聚合的抑制作用。聚丙烯酰胺凝胶电泳一般采用垂直装置。
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